[发明专利]一种全血RNA快速裂解液及应用

说明书

本发明提供一种不需要先裂解红细胞的全血RNA快速裂解液及RNA提取方法，该方法大限度的减少有毒试剂的使用，简化了RNA提取步骤，纯化获得的RNA完整性好，纯度高，可直接用于RT‑PCR、Northern blot、Dot blot等各种分子生物学实验；本发明公开了一种全血RNA快速裂解液，每1000ml体积由以下组分用量组成：硫氰酸胍，0.2M‑4M；硫氰酸铵，0.2M‑3M；无水乙酸钠，0.01M‑0.2M；冰乙酸，0.05‑0.3M；月桂酰基肌氨酸钠，0.1％‑2％(W/V)；氯化钠，0.02M‑0.3M；甘油，1％‑15％(V/V)；水饱和酚溶液，10％‑75％(V/V)；其余为DEPC处理水。

技术领域

本发明涉及血液RNA提取技术领域，尤其涉及一种全血RNA快速裂解液及应用。

背景技术

血液由于其易获得的特性，使其在临床辅助检查手段中使用占比最高。血液检查不仅是诊断各种血液病的主要依据，对其他系统疾病的诊断和鉴别也可以提供许多重要信息。RNA提取是分子生物学研究中一项基本内容，是进行基因表达分析的基础。全血RNA的快速提取节省了从事临床研究的科研工作者的时间，降低了RNA降解的概率，而且能加速对某些疾病的快速诊断。

根据提取RNA吸附介质的不同，血液RNA提取的主要方法有沉淀法、磁珠法及硅胶柱法。沉淀法是运用RNA不溶于乙醇和异丙醇的特性，将RNA进行离心沉淀的方法。该方法操作步骤繁琐，耗时长，且通量低，所获得RNA质量不稳定。磁珠法和硅胶柱法的基本原理相同，只是磁珠法是在分离液盐和外加磁场的作用下将RNA富集到磁珠上，从而实现分离。而硅胶柱法是在分离液盐的作用下将RNA富集到固相硅胶柱上，通过离心实现分离。

提取方法从细胞裂解的方式分，有Trizol法(苯酚法)、SDS法、CTAB法、硫氰酸胍法等多种，以及结合蛋白酶K运用的方法。

Trizol法由于通用性好，RNA提取质量高，常用于血液RNA提取；但其步骤中使用的氯仿为一种有毒试剂，对实验操作者的健康不利。本发明有效避开该种有毒试剂，提取效果却不亚于Trizol法提取效果。在其他各种细胞裂解方式方法中均需要先进行红细胞裂解，获得白细胞后再进行裂解,该类方法在操作上存在耗时的特点，不利于大量样本的RNA提取。本发明所述裂解液不需要先裂解红细胞，能有效缩短RNA提取时间。

当前柱法提取RNA的基本原理为：在样本前处理及裂解液裂解的作用下，RNA从细胞中释放；在高盐低pH的溶液下，将含RNA的上清转移到核酸纯化柱上，离心后RNA结合于核酸纯化柱；在洗液1的作用下，进一步将核酸纯化柱膜中的蛋白等杂质去除；在洗液2的条件下，进一步将核酸纯化柱膜中的盐离子进行去除；最后在低盐条件下将RNA从纯化柱中洗脱。

本发明提供一种不需先裂解红细胞的全血RNA快速裂解液及RNA提取方法，简化了实验步骤，缩短了整个RNA提取时间,同时大限度的减少有毒试剂的使用。

发明内容

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种全血RNA快速裂解液，每1000ml体积由以下组分质量/体积组成：

硫氰酸胍，0.2M-4M；

硫氰酸铵，0.2M-3M；

无水乙酸钠，0.01M-0.2M；

冰乙酸，0.05-0.3M；

月桂酰基肌氨酸钠，0.1％-2％(W/V)；

氯化钠，0.02M-0.3M；

甘油，1％-15％(V/V)；

水饱和酚溶液，10％-75％(V/V)；

其余为DEPC处理水。

所述全血RNA快速裂解液在全血柱法提取RNA的应用；