[发明专利]一种利用丝素低聚肽水相剥离石墨制备多肽-石墨烯复合材料的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用丝素低聚肽水相剥离石墨制备多肽-石墨烯复合材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，制备丝素低聚肽溶液

清理蚕茧，剪碎成0.5-1.5cm²后按照浴比为1：200的比例浸于质量分数为0.5％Na₂CO₃溶液中，100℃下脱胶30-60分钟，过滤洗净，重复脱胶和过滤洗涤操作2-3次；将脱胶后蚕丝烘干，按照浴比为1：30的量置于质量分数为50％CaCl₂溶液中，80-98℃下水浴反应40-60分钟，反应过程中持续搅拌，再将溶解的混合溶液在1000-3500rpm的转速下离心15-60min，取上清液装入截留分子量为8000-14000Da的透析袋流水透析1-2d,蒸馏水透析1-2d，再放入质量分数为10％的聚乙烯二醇溶液中浓缩，浓缩后的丝素蛋白溶液冷冻干燥得丝素蛋白粉；

将丝素与碱性蛋白酶在60℃下水浴反应，且反应过程中反应体系的pH值维持在8.5；反应结束后煮沸10-20min进行酶的灭活；自然冷却后，反应体系以10000-15000rpm离心15-30min，除去酶蛋白及未完全水解的丝素蛋白，取上清液，浓缩得丝素肽粗产物；丝素肽粗产物与8600U的放线菌酶按照固液比为100：1进行混合，pH 8.5，温度为50-60℃，酶解60-80min得丝素酶解液；用截留分子量1500Da以下的透析袋流水透析丝素酶解液2-3天，得丝素酶解低聚肽溶液，-80℃的超低温冷冻干燥，得丝素低聚肽粉；

取丝素低聚肽粉溶于用氢氧化钠调节水至pH为8.0的溶液，得10.0mg/ml的丝素低聚肽溶液；

步骤2，取10.0mg/ml的丝素低聚肽溶液，通过加入用氢氧化钠调节水至pH为8.0的溶液，来调节至浓度为0.2-5.0mg/ml的丝素低聚肽溶液；

步骤3，称取0.1-0.5mg石墨粉放入小瓶中，再加入0.4-2.0ml浓度为0.2-5.0mg/ml的丝素低聚肽溶液，得未结合的丝素低聚肽-石墨混合物；

步骤4，将未结合的丝素低聚肽-石墨混合物放入超声水浴锅中20-30℃下超声处理4小时以上；

步骤5，将超声初拉力后的溶液移至离心管中离心，去除未剥离的大颗粒石墨，取上清液；

步骤6，将上清液至新的离心管中，离心，除去为附着到石墨上的肽，去上清液，保留沉淀物，烘干即得多肽-石墨烯复合材料。

2.根据权利要求1所述的一种利用丝素低聚肽水相剥离石墨制备多肽-石墨烯复合材料的方法，其特征在于，步骤2中所述丝素低聚肽溶液浓度为1.0mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种利用丝素低聚肽水相剥离石墨制备多肽-石墨烯复合材料的方法，其特征在于，步骤5中离心转速为800-1600rpm，离心时间为50min以上。

4.根据权利要求1所述的一种利用丝素低聚肽水相剥离石墨制备多肽-石墨烯复合材料的方法，其特征在于，步骤6中离心转速为10000-15000rpm，离心时间为50min以上。

5.基于权利要求1制备的多肽-石墨烯复合材料在疏水性药物传递上的应用。