[发明专利]班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因及其扩增用引物组合和克隆方法

说明书

本发明提供了班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因及其扩增用引物组合和克隆方法，属于分子生物学以及基因克隆技术领域。所述GLD基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。该基因的获得可以进一步研究该基因在班氏跳小蜂细胞中的组成及基因结构，并为其在班氏跳小蜂生殖生理中的作用和功能区域位置，以及与其他物种的区别提供理论依据。

技术领域

本发明涉及分子生物学及基因克隆技术领域，尤其涉及班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因及其扩增用引物组合和克隆方法。

背景技术

葡糖脱氢酶Glucose dehydrogenase(GLD)是一类结构功能多样的小肽分子，分子量大小为2Kbp左右，等电点介于5～7之间。该基因广泛分布于节肢动物体内，在卵和幼虫阶段，该基因分布在昆虫的诸多表皮衍生组织中，包括一些体壁繁殖器官中；然而，在成虫阶段，该基因仅保守分布于某些生殖器官中，如受精囊。对于寄生蜂雌蜂而言，因其吸收和释放的精子数量与受精卵的数量密切相关。GLD基因可通过影响受精囊内精子储存和释放量，来提高雌性的受精能力。

班氏跳小蜂Aenasius bambawalei是重要外来入侵性害虫——扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis的优势种寄生蜂。目前，班氏跳小蜂种群的室内大量饲养和繁殖存在较多技术瓶颈，其中种群退化和子代偏雄性是制约该蜂研究与应用的重要因素。而提高雌蜂的受精能力，可以有效解决以上问题。

目前未见关于班氏跳小蜂GLD基因的相关研究报道，NCBI数据库中关于其他寄生蜂GLD基因的序列亦为预测序列，尚无准确的序列上传记录及相关的文献报道。

发明内容

鉴于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因及其扩增用引物组合和克隆方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因，所述GLD基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

本发明还提供了用于班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因扩增的引物组合，包括上游引物和下游引物，所述上游引物包括A-Gld-P 1F，其核苷酸序列如 SEQ ID No.1所示；所述下游引物包括A-Gld-P 2R，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

优选的，所述上游引物还包括A-Gld-P 2F，其核苷酸序列如SEQ ID No.3 所示；所述下游引物还包括A-Gld-P 1R，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

优选的，所述上游引物还包括A-Gld-P 2F，其核苷酸序列如SEQ ID No.3 所示；所述下游引物还包括A-Gld-P 1.1R，其核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

本发明提供了一种克隆班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因的方法，包括如下步骤：

(1)提取班氏跳小蜂基因组DNA，得到扩增用模板DNA；

(2)用上述的引物组合对所述扩增用模板DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)对所述扩增产物进行测序，得到班氏跳小蜂葡糖脱氢酶GLD基因序列。

优选的，步骤(2)所述PCR扩增包括反应A和反应B；

所述反应A为：用上游引物A-Gld-P 1F和下游引物A-Gld-P 1R对所述扩增用模板DNA进行PCR扩增；

所述反应B为：用上游引物A-Gld-P 2F和下游引物A-Gld-P 2R对所述扩增用模板DNA进行PCR扩增。

优选的，所述反应A和反应B使用的酶独立为高保真DNA聚合酶。

优选的，步骤(2)所述PCR扩增包括反应A’和反应B；