[发明专利]一种干细胞铺底工作液及其应用

说明书

本发明属于干细胞培养技术领域，尤其涉及一种干细胞铺底工作液及其应用。本发明提供了一种干细胞铺底工作液，包括：Matrigel和VTN‑N；所述Matrigel和所述VTN‑N的体积比为2:1～3:1。实验结果表明，采用Matrigel和VTN‑N的体积比为2:1～3:1的干细胞铺底工作液进行铺底处理再进行干细胞复苏，复苏效果好，可减少团聚生长，加快生长速度，减少细胞死亡；采用本发明干细胞铺底工作液进行铺底处理再复苏培养，干细胞的数量生长符合干细胞的生长趋势。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，尤其涉及一种干细胞铺底工作液及其应用。

背景技术

胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)在体内可分化为3个胚层来源的所有细胞，进而参与形成机体所有组织和器官，在再生医学、组织工程和药物发现与评价等领域极具应用价值。但是ESCs面临的伦理、免疫排斥以及资源不足等难题在干细胞生物学的基础研究和临床应用中阻碍了其发展，而人类诱导多功能干细胞(human inducedpluripotent stem cells，hiPSC)的获取方法则能很好的克服了这些问题。因此，在同样称之为“干细胞”领域内，hiPSC相比于胚胎干细胞，既可以避免生理伦理问题，又可避免无法控制的分化差异。

hiPSC是具有类似胚胎早期多能干细胞分子特性、更新能力和分化潜能的一类多能干细胞，可以经人工干预定向分化成特定的功能性细胞、组织和器官，在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，为疾病机制研究与细胞治疗提供了全新的途径。现有研究通过hiPSC表明，Oct4基因和Nanog基因共同调控细胞的生长发育和维持全能性，Lin基因和Fgf4基因不仅在维持细胞全能性上发挥重要作用，而且促进了细胞增值和组织修复。

但是，hiPSC在体外进行复苏和培养的环境要求严格，采用常规培养方式进行复苏或培养存在易团聚生长、生长缓慢或死亡率较高的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种干细胞铺底工作液及其应用，用于解决现有技术中复苏或培养干细胞存在易团聚生长、生长缓慢或死亡率较高的问题。

本发明的具体技术方案如下：

一种干细胞铺底工作液，包括：Matrigel和VTN-N；

所述Matrigel和所述VTN-N的体积比为2:1～3:1。

实验结果表明，采用Matrigel和VTN-N的体积比为2:1～3:1的干细胞铺底工作液进行铺底处理再进行干细胞复苏，复苏效果好，可减少团聚生长，加快生长速度，减少细胞死亡；采用本发明干细胞铺底工作液进行铺底处理再复苏培养，干细胞的数量生长符合干细胞的生长趋势。

优选的，所述Matrigel和所述VTN-N的体积比为3:1。

优选的，所述Matrigel和所述VTN-N的体积比为2:1。

优选的，所述Matrigel在所述干细胞铺底工作液中的浓度为6.67～7.5μL/mL；

所述VTN-N在所述干细胞铺底工作液中的浓度为2.5～3.33μL/mL。

本发明中，干细胞铺底工作液的配制方法包括：将Matrigel和VTN-N分别冻融，采用DPBS进行稀释，得到Matrigel稀释液和VTN-N稀释液，再将Matrigel稀释液和VTN-N稀释液混合，得到干细胞铺底工作液。

本发明还提供了上述技术方案所述干细胞铺底工作液在干细胞复苏中的应用。

本发明还提供了一种复苏干细胞的方法，包括以下步骤：

采用所述干细胞铺底工作液对培养容器进行铺底，铺底结束后弃去所述干细胞铺底工作液，再在所述培养容器中接种干细胞进行复苏。