[发明专利]一种人工抗菌肽CAH、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种人工抗菌肽CAH、制备方法及其应用，属于抗菌肽领域。本发明的人工抗菌肽CAH的制备方法，合成一条具有抗菌肽潜力的杂合肽CAH进行全基因，根据大肠杆菌密码子偏好性编码杂合肽CAH的基因片段以提高其在大肠杆菌中的表达量，并且实现了抗菌肽的大量融合表达，为实现抗菌肽的其他活性研究奠定了基础。本发明的人工抗菌肽CAH及其应用，具有抑菌活性高、稳定性好、溶血性低特点，能够应用于食品、医学、畜牧领域。

技术领域

本发明属于抗菌肽领域，尤其是一种人工抗菌肽CAH、制备方法及其应用。

背景技术

近些年来，抗生素的出现使不少疾病得到有效治疗，但近些年来随着抗生素的大量使用甚至滥用，导致了耐药性菌株甚至耐多重药性菌株的出现，严重威胁到人类的健康问题。抗菌肽因其稳定的理化性质、广谱的抗菌性，且具有与抗生素不同的作用靶点和机制，对靶菌株不易产生耐药性且对抗生素耐药菌也有很好的抑菌效果，有希望成为抗生素的替代品，受到了各界研究者的广泛关注。

但是天然的抗菌肽提取分离过程较为困难、繁琐且分离出来的抗菌肽抗菌活性较低，且具有较高的溶血性，在食品、医药及农业等方面的应用受到限制。人工抗菌肽CAH可以克服天然抗菌肽的缺点，具有重要开发价值。人工抗菌肽CAH在合成方面，实验室内就可以实现，通过基因工程的方式，有效且大量合成目的肽，成本较天然提取方式低，但是目前来看准确性方面有待优化。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种人工抗菌肽CAH、制备方法及其应用。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种人工抗菌肽CAH，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示。

一种多核苷酸，是如序列表中Seq ID No.2所示核苷酸序列的多核苷酸，能够编码Seq ID No.1所示的氨基酸序列。

一种载体，具备上述多核苷酸。

上述人工抗菌肽CAH的制备方法，包括以下步骤：

1)根据抗菌肽数据库中的母体肽Cecropins、AR-23和Hs-AFP的氨基酸序列，设计出人工抗菌肽CAH的核苷酸序列Seq ID No.2；

2)在核苷酸序列Seq ID No.2上下游分别增加EcoR I和Xho I位点，利用EcoR I和Xho I双酶切，并与EcoR I和Xho I双酶切过的表达载体pET32a连接，转入大肠杆菌进行重组质粒，筛选出高表达菌株；

3)添加IPTG进行诱导表达，得到目标蛋白；

4)复性去除目标蛋白的包涵体，而后通过镍离子亲和层析柱纯化，得到人工抗菌肽CAH。

上述的人工抗菌肽CAH的在制备抗菌剂中应用。

进一步的，针对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的人工抗菌肽CAH的制备方法，合成一条具有抗菌肽潜力的杂合肽CAH进行全基因，根据大肠杆菌密码子偏好性编码杂合肽CAH的基因片段以提高其在大肠杆菌中的表达量，并且实现了抗菌肽的大量融合表达，为实现抗菌肽的其他活性研究奠定了基础。

本发明的人工抗菌肽CAH及其应用，具有抑菌活性高、稳定性好、溶血性低特点，能够应用于食品、医学、畜牧领域。

附图说明

图1为本发明的人工抗菌肽CAH PCR扩增电泳图；

图2为本发明的人工抗菌肽CAH目的蛋白表达电泳图。

具体实施方式