[发明专利]一种纳米凹凸棒石的骨修复支架制备方法及其应用

权利要求书

1.一种纳米凹凸棒石的骨修复支架制备方法及其应用，包括以下制备步骤：

(1)、骨髓间充质干细胞的培养

(2)、凹凸棒石纳米的制备

使用变频式行星球磨机，六偏磷酸钠为助磨剂和分散剂，以纯水为研磨介质，2000rpm研磨凹凸棒粉末1～2小时，通过吸附、电化学作用和化学反应，使凹凸晶体充分分散为200～500纳米级晶体颗粒。

(3)、电纺3D打印制备含纳米凹凸棒石骨修复支架

(3-1)、模型的建立

采用Auto CAD和Materialise Mimics结合3D打印机配套软件建立打印模型，为多层立方体状，各层结构路径间隙根据需要进行调整，保存后输出打印程序代码。

(3-2)、打印材料的制备

取适量生物高分子材料A在温和搅拌下，缓慢加入分散剂B中至混匀。继续搅拌并缓慢加入0.1％～30％(质量体积比)的纳米凹凸棒，制得分散液并加入3D打印机静电纺丝喷头料筒中待用。

(3-3)、打印设备的参数配置

调节熔融静电纺丝3D打印设备的工艺参数，将步骤2制得的分散液放入料筒后接入3D打印机，加热至65℃～80℃，以恒定流速0.8～5mL/hr通过20号针头递送，喷头移动速度25～50mm/s。针尖部位施加高压5～20kV，接受面施加2～15kV的负电压。分散液在电压作用下从喷头出信长流体射流，当射流向接受面加速时，溶剂蒸发，带电聚合物裹挟着纳米凹凸棒石按程序设定在接受面沉积成3D支架。打印完成后，-40℃真空冻干24～72。

(4)、骨髓间充质干细胞的种植：取适量骨髓间充质干细胞种植于各支架区域。

2.根据权利要求1所述的一种纳米凹凸棒石的骨修复支架制备方法及其应用，其特征在于：所述生物高分子材料A由聚乳酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚对二氧环己酮中的一种或几种构成。

3.根据权利要求1所述的一种纳米凹凸棒石的骨修复支架制备方法及其应用，其特征在于：所述分散剂B为聚乙烯醇、聚乙二醇、二氯甲烷、六氟异丙醇和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种的混合物。

4.根据权利要求1所述的一种纳米凹凸棒石的骨修复支架制备方法及其应用，其特征在于：所述骨髓间充质干细胞的种植方法如下：移除贴壁生长的骨髓间充质干细胞周围培养基，使用0.01M PBS洗两遍，加入适量为0.25％(质量百分比)胰酶消化3分钟，观察细胞脱落状况，适时使用含血清培养基中止胰酶效果。收集细胞悬液，离心弃上清，培养基重悬后，接种于各支架区域，24小时后更换新鲜培养基，此后每隔2天换液继续培养，待后续实验。