[发明专利]一种具有祛除妊娠纹功效的护肤制品及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种具有祛除妊娠纹功效的护肤制品，其特征在于，所述护肤制品由如下体积份数的原料组成：占芭花提取液10～25份、干细胞提取物20～45份、山茶油5～12份、烟酰胺1～5份、维生素C 1～5份、泛醇0.5～3份、PEG-40氢化蓖麻油1～4份、防腐剂0.5～2份、羟乙基纤维素0.1～0.8份、去离子水5～60份以及柠檬酸或柠檬酸钠，柠檬酸或柠檬酸钠调节pH值为6；

所述干细胞提取物包括破碎后间充质干细胞外泌体和干细胞培养上清液外泌体；

所述的护肤制品的制备方法，包括如下步骤：

(1)按配方称取原料；

(2)取烟酰胺和维生素C放入容器中，加去离子水充分溶解后，加入占芭花提取液，搅拌混合均匀；

(3)往步骤(2)的溶液中加入羟乙基纤维素，充分溶解搅拌至均质；

(4)往步骤(3)的溶液中加入山茶油、泛醇和PEG-40氢化蓖麻油，搅拌至均质；

(5)往步骤(4)的溶液中加入干细胞提取物，搅拌至混合均匀，然后加入防腐剂，搅拌混合均匀；

(6)往步骤(5)的溶液中加入柠檬酸或柠檬酸钠调节pH值，即可制得所述的护肤制品；

所述占芭花提取液的制备方法：取占芭花鲜花，回流提取3次；第1次将占芭花与65％乙醇以质量比为1:18进行提取1.5h；第2次将占芭花与60％乙醇以质量比为1:10进行提取1.5h；第3次将占芭花与60％乙醇以质量比为1:8进行提取1.5h；将3次提取的提取液分别用三层纱布过滤，合并滤液，将滤液减压浓缩至占芭花重量的5倍，即可制得占芭花提取液；

所述干细胞提取物的制备方法，包括如下步骤：

干细胞体外规模化培养：按照GMP细胞培养，获得间充质干细胞；

将步骤①培养后收集的间充质干细胞进行超声波破碎，得到破碎后间充质干细胞外泌体；

收集步骤①所述的间充质干细胞的培养上清液，获得干细胞培养上清液外泌体；

将步骤②所述的破碎后间充质干细胞外泌体与步骤③所述的干细胞培养上清液外泌体分别溶于生理盐水后，等体积混合，搅拌均匀即可制得干细胞提取物；

所述步骤①中，使用细胞工厂十层GMP级设备扩增间充质干细胞，待细胞融合率大于95％时即可收获得到3×10⁸的间充质干细胞；

所述步骤②中，所述间充质干细胞进行超声波破碎具体操作为按1×10⁸细胞数量加入100ml生理盐水中，4℃ 300×g离心10min去除细胞碎片，收集上清；然后4℃ 2500×g离心30min去除细胞凋亡小体，收集上清；13000×g离心1h去除血小板杂质，收集上清；再4℃100000×g离心70min即可得到破碎后间充质干细胞外泌体；

所述步骤③中，所述收集步骤①所述的间充质干细胞的培养上清液的具体操作为：将步骤①所述的间充质干细胞进行4℃ 2000×g离心10min去除细胞碎片，收集上清；13000×g离心1h去除血小板杂质，收集上清；4℃ 100000×g离心70min即可制得干细胞培养上清液外泌体；

对步骤②所述的破碎后间充质干细胞外泌体和步骤③所述的干细胞培养上清液外泌体分别进行BCA蛋白浓度测定，所述步骤②中测得蛋白浓度为9.5mg/ml，所述步骤③中测得蛋白浓度为53.6mg/ml。

2.如权利要求1所述的护肤制品，其特征在于，所述护肤制品由如下体积份数的原料组成：占芭花提取液20份、干细胞提取物40份、山茶油10份、烟酰胺5份、维生素C 5份、泛醇2份、PEG-40氢化蓖麻油3份、防腐剂2份、羟乙基纤维素0.7份、去离子水12份以及柠檬酸或柠檬酸钠。

3.如权利要求1所述的护肤制品，其特征在于，所述防腐剂的制备方法：称取6份对羟基苯甲酸甲酯，加入17倍体积1,3-丁二醇溶液，搅拌至澄清，充分溶解，即可制得所述防腐剂；步骤(6)中所述pH值为6。