[发明专利]一种人源化纳米抗体及其制备方法在审
| 申请号： | 201910939111.1 | 申请日： | 2019-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN110642946A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 纪雪梅;刘煜;赵明军 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C07K16/24 | 分类号： | C07K16/24 |
| 代理公司： | 32200 南京经纬专利商标代理有限公司 | 代理人： | 唐循文 |
| 地址： | 210009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纳米抗体 人源化 氨基酸序列 核苷酸序列 人源化改造 突变 疾病治疗药物 酵母表达系统 生物医药领域 关键氨基酸 抗原亲和力 多重序列 热稳定性 生物活性 改造 保留 联合 开发 | ||
1.一种人源化抗TNFα纳米抗体，其特征在于，所述人源化抗TNFα纳米抗体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.11所示。
2.根据权利要求1所述的一种人源化抗TNFα纳米抗体，其特征在于，编码人源化抗TNFα纳米抗体的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.12所示。
3.根据权利要求1所述的一种人源化抗TNFα纳米抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
1)通过IMGT抗体CDRs区Numbering方案，对抗TNFα纳米抗体的CDRs与FR进行分区；
2)将对CDR3构象有影响的FR2骨架区的第42，50以及52位关键氨基酸进行不同组合突变，突变TNFα纳米抗体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1，3，5，7，9，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2，4，6，8，10，确定50和52位氨基酸共突变对构象影响不大；
3)将抗TNFα纳米抗体NbTNFα通过IgBLAST进行序列相似性搜索，搜索出与其序列同源性较高的人抗体胚系基因序列，并利用MEGA5.0软件对抗TNFα纳米抗体与人抗体胚系基因序列进行多重序列对比；
4)人源化方案的制定：根据步骤2)和3)的分析结果，对抗TNFα纳米抗体进行合理的人源化设计，按如下进行设计：
4.根据权利要求3所述的一种人源化抗TNFα纳米抗体制备方法，其特征在于通过酵母表达载体进行诱导表达，纯化后获得人源化抗TNFα纳米抗体。
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