[发明专利]一种用于转座酶片段化的试剂及其应用

权利要求书

1.一种用于转座酶片段化的试剂，其特征在于包括独立包装的如下组件：Tn5转座酶、第一接头、第二接头以及转座反应缓冲液，所述Tn5转座酶的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ ID NO.4～5所示。

2.根据权利要求1所述试剂，其特征在于：所述第一接头包括第一单链DNA和第二单链DNA，所述第一单链DNA包括依次连接的捕获标签、指定的单链DNA和所述转座酶的识别序列，所述第二单链DNA为所述识别序列的互补序列；所述第二接头包括所述识别序列以及所述识别序列的互补序列。

3.根据权利要求1所述试剂，其特征在于还包括独立包装的正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液。

4.根据权利要求1所述试剂，其特征在于还包括独立包装的片段化反应缓冲液、终止溶液中的任意一种或多种。

5.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1-3中任一项所述试剂。

6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于还包括独立包装的DNA磁珠。

7.一种片段化核酸文库的构建方法，其特征在于包括：

将Tn5转座酶、第一接头、第二接头于转座反应缓冲液中混合，并在室温下孵育30～120min，获得转座子复合物，之后进行纯化处理，其中所述Tn5转座酶的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ ID NO.4～5所示；

将纯化后的转座子复合物、人类基因组DNA与片段化反应缓冲液、超纯水混合，并在50～60℃孵育3～15min，之后加入终止溶液50～60℃孵育3～7min终止反应，获得片段化产物；

之后将片段化产物与正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液混合，并进行PCR反应，获得富集的DNA片段。

8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于具体包括：向所述片段化反应液内加入DNA磁珠并充分混匀，室温孵育5～20min，之后以100～300rpm的转速离心5～20s，之后分离出DNA磁珠，先后以乙醇、超纯水清洗，完成所述纯化处理。

9.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于还包括：从富集的DNA片段中分选出指定长度的DNA片段，获得片段化核酸文库。

10.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于还包括：对所获片段化核酸文库的纯度进行检测。