[发明专利]柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株及其应用

说明书

本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株，该弱毒株相对于强毒株产生的基因突变点是：TGB区域的T⁵³⁰⁶→C，A⁵⁴⁸²→G，T⁵⁷⁹²→C，A⁶⁰⁵⁸→G，C⁶⁰⁹⁶→T，以及位于CP基因上的T⁶⁸¹⁷→C。还公开了该弱毒分离株在防治柑橘黄化脉明病毒强毒株系侵染方面的应用。本发明获得了柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株AY001，AY001可有效保护植株免受CYVCV强毒株系的侵染。

技术领域

本发属于病毒技术领域，具体涉及一种柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株及其应用。

背景技术

交叉保护(Mild strain cross protection，MSCP)是指植物受某一病毒株系(通常是弱毒株系)侵染后，可以免受同种病毒的不同株系或亲缘关系较近的另一种病毒(即强毒株或挑战毒株)的侵染。植物病毒所表现的交叉保护作用程度不同，若直接接种挑战毒株本应该表现局部坏死症状，当受先接种的病毒干扰后，挑战毒株无症状表现就称作完全保护作用；挑战毒株略有增殖和显出轻症，就属于不完全保护作用；如果与挑战毒株单独侵染时的症状完全相同，就属于完全无保护作用。目前，交叉保护作用主要表现在抑制挑战病毒的复制、限制挑战病毒的移动、延迟植株发病的时间和症状减轻或者不发病四个方面。在生产实践中，交叉保护作用的前提是获得弱毒株系。

获得弱毒株系的传统方法主要有三种：从自然发病的植株中选择，在发病群体中生长状况较好的植株就最有可能是感染了弱毒株系而受到了保护作用，防治柑橘衰退病毒病的弱毒株系就是如此发现的；通过高温诱变获得；化学诱变获得。随着植物病毒侵染性克隆构建技术的发展，研究者可以在明确病毒致病力和基因组功能的基础上，通过定点突变获得弱毒株系。用此方法构建的ZYMV、PRSV、三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus，CIYVV)和菜豆黄花叶病毒(Bean yellow mosaic virus，BYMV)等弱毒株系已广泛应用于实际生产中。此外，利用植物病毒侵染性克隆表达病毒的基因也能介导对病毒的交叉保护作用。例如，Culver等将TMV的CP基因序列插入PVX侵染性cDNA克隆中，重组质粒接种烟草后能对随后TMV挑战毒株接种产生保护作用。

柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow clearing vein virus，CYVCV)作为2009年我国发现侵染柑橘的一种新病毒，会引起柠檬和酸橙嫩叶脉明、黄化、叶片反卷和皱缩等症状，严重时可导致嫩叶脱落、叶脉坏死，造成树势衰弱、果实产量下降，有时甚至绝收；近几年，该病毒在我国柑橘产区的发生呈现逐年上升趋势。CYVCV不仅可以侵染柠檬、酸橙、香橼，产生严重为害，而且可以侵染甜橙、宽皮柑橘、葡萄柚等柑橘种类。同时，CYVCV在自然界具有高效的传播虫媒，在我国的绝大多数柑橘产区均已检测到CYVCV病毒的存在。因此，CYVCV具有暴发流行的巨大风险，已经成为影响我国柑橘产业尤其是柠檬产业的一个重要问题。