[发明专利]一种杂交瘤细胞株、抗旋毛虫新生幼虫期丝氨酸蛋白酶的单克隆抗体及应用

说明书

一种杂交瘤细胞株、抗旋毛虫新生幼虫期丝氨酸蛋白酶的单克隆抗体及应用，属于旋毛虫(T.spiralis)的防治领域。针对如何对旋毛虫病进行特异性诊断的技术问题，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.18319以及由上述杂交瘤细胞株所分泌单克隆抗体。所述单克隆抗体能够特异性的识别ASKEDS氨基酸基序。本发明建立旋毛虫(T.spiralis)血清学诊断方法奠定了基础。

技术领域

本发明属于旋毛虫(T.spiralis)的防治领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、抗旋毛虫新生幼虫期丝氨酸蛋白酶的单克隆抗体及应用。

背景技术

旋毛虫病主要是由于宿主生食或半生食含有旋毛虫的肉类而引发。人旋毛虫病潜伏期平均为2周，急性期患者的主要症状为发烧、肌肉剧烈疼痛、严重的腹泻、面部水肿以及嗜酸性粒细胞增多等，症状可以持续数周并导致机体衰竭，尤其重度感染者可出现心肌及大脑严重损伤，甚至死亡。

鉴于旋毛虫对公共卫生安全和人类健康造成的极大威胁与危害，世界动物卫生组织(OIE)将旋毛虫病列为屠宰动物强制性检验及首检必检病种。在我国，旋毛虫病一直被列为重中之重，更是除烈性人兽共患病之外可引起突发性公共卫生事件的典型病种之一。目前旋毛虫检测仍然采用相对费时费力，而且灵敏性低的镜检法(3条幼虫/g肉)和集样消化法(1条幼虫/g肉)进行旋毛虫检测。

国内外学者对旋毛虫检测的方法进行了大量的研究，如间接荧光免疫试验，免疫酶染色试验，免疫印迹试验，免疫吸附试验(ELISA)等，酶联免疫吸附试验(ELISA)是进行旋毛虫感染检测的最常用的免疫学方法，其具有高的敏感性，能检测底限可低至每100g肌肉组织中1条幼虫。目前，旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ES抗原是OIE及国际旋毛虫委员会规定的唯一的用于血清学抗体检测的标准抗原。然而ES抗原成分复杂，制备繁琐、生产周期长、批次质量不均，而且存在严重的诊断盲区(感染后19d前无法检出)和交叉反应等问题，因而阻碍了其实际应用。

目前利用差减杂交SSH法(suppression subtractive hybridization)已成功构建旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库，率先筛选并克隆到一条旋毛虫新生幼虫高反应原性及高特异性抗原基因-丝氨酸蛋白酶基因，命名为Ts-T668。Ts-T668由一个酶活性区和一个C末端区组成，但C末端区的功能不清楚。

发明内容

针对如何对旋毛虫病进行特异性诊断的技术问题，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.18319。

本发明还提供了一种抗旋毛虫新生幼虫期丝氨酸蛋白酶的单克隆抗体，是由上述杂交瘤细胞株CGMCC No.18319所分泌。

进一步地限定，所述单克隆抗体所识别的抗原表位多肽氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明所述的杂交瘤细胞株可用于制备诊断旋毛虫T.spiralis感染的试剂，本发明所述的SEQ ID NO.1所示的抗原表位多肽可用于制备诊断或预防旋毛虫T.spiralis感染的疫苗。

有益效果

单克隆抗体具有与抗原结合的特异性强、纯度好、重复性强、便于质量控制、亲和力好且可大量生产的优势，因而被广泛的应用于免疫学检测方法的建立。所以，筛选出可以分泌抗Ts-T668-C蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定出其所分泌的单克隆抗体所识别的Ts-T668-C蛋白特异性B细胞表位对旋毛虫病的诊断方法的改进，及亚单位疫苗的研制具有重要的意义。

本发明所制备的单克隆抗体特异的与旋毛虫新生幼虫和6日龄成虫粗提物抗原发生特异性反应。免疫荧光表明所获得的单克隆抗体特异性的识别新生幼虫和6日龄成虫的胚胎，不与其它的时期的虫体发生反应。Ts-T668-C竞争ELISA检测结果表明，单克隆抗体Ts-T668-5D4-Ab可以与旋毛虫感染阳性猪血清竞争结合Ts-T668-C抗原。