[发明专利]一种DNA编码化合物库的液相色谱纯化方法

说明书

本发明提供了一种用于DNA编码化合物库纯化的液相色谱纯化方法，所述方法为：取DNA编码化合物或其中间体，利用液相色谱柱进行洗脱，即可；其中，洗脱采用的流动相中，A相含有水、二异丙基乙胺、六氟异丙醇，B相含有甲醇。实验结果表明，本发明提供的液相纯化方法可以有效去除DNA编码化合物库合成过程中引入的单段DNA片段，还能够有效去除多个单段DNA片段相连生成的DNA片段杂质，能够显著提升DNA编码化合物库的最终产物纯度，并显著减少DNA片段的用量，降低生产成本，具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种DNA编码化合物库的液相色谱纯化方法。

背景技术

在新药研发领域，针对生物靶标的高通量筛选是快速获得先导化合物的主要手段之一。然而，基于单个分子的传统高通量筛选所需时间长、设备投入巨大、库化合物数量有限(数百万)，且化合物库的建成需要数十年的积累，限制了先导化合物的发现效率与可能性。近年来出现的DNA编码化合物库技术(WO2005058479、WO2018166532、CN103882532)，结合了组合化学和分子生物学技术，在分子水平上将每个化合物加上一个DNA标签，能在极短的时间内合成高达亿级的化合物库。而且化合物能够通过基因测序的方法进行识别，大幅度地增加了化合物库的大小和合成效率，成为下一代化合物库筛选技术的趋势，并开始在制药行业广泛应用，产生了诸多积极的效果(Accounts of Chemical Research,2014,47,1247-1255)。

DNA编码化合物库(DEL)的构建利用组合化学的“组合-拆分”策略，可快速得到数量巨大的化合物库，并且化合物中的每一维结构信息都可以由唯一的DNA片段进行标记。在DNA编码化合物库的构建过程中，每一维度都需要加入过量的DNA片段进行反应以保证化合物被正确标记。然而过量的DNA片段会继续与下一维度的DNA片段发生反应，导致后续的磁珠纯化不完全，从而影响最终DNA编码化合物库的纯度。另外由于DNA编码化合物库的成本大部分来自于DNA片段，过量的DNA片段会增加下一维度DNA片段的使用量，从而导致构建成本的大幅增加。

中国专利201610229301.0公开了一种固相合成DNA编码化合物库的方法，该专利对固相合成DNA编码化合物生产过程中的粗产物用蒸馏水和0.1M TEAA(醋酸三乙胺)缓冲溶液洗涤，进行纯化。但是，该纯化方法仅用于固相合成的纯化，并且不能除去未反应的DNA片段。目前液相合成DNA编码化合物库常用的纯化方法(如TEAA体系)并不能很好地除去未反应的DNA片段，因此，开发一种新的能够有效除去过量DNA片段的纯化方法，能大幅节约构建化合物库的成本，并且提高DNA编码化合物库的纯度，可以极大地提高DNA编码化合物库的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA编码化合物库的液相色谱纯化方法。

本发明提供了一种用于DNA编码化合物库纯化的液相色谱纯化方法，取DNA编码化合物或其中间体，利用液相色谱柱进行洗脱，即可；其中，洗脱采用的流动相中，A相含有水、二异丙基乙胺、六氟异丙醇，B相含有甲醇。

进一步地，所述流动相中，B相的体积百分数为1％～90％。

进一步地，所述A相由水、二异丙基乙胺和六氟异丙醇组成。

进一步地，所述A相中，异丙基乙胺的体积百分数为0.01～1％，六氟异丙醇的体积百分数为0.5％～10％，其余为水；

优选地，所述A相中，异丙基乙胺的体积百分数为0.05～0.5％，六氟异丙醇的体积百分数为1％～5％，其余为水；

更优选地，所述A相中，异丙基乙胺的体积百分数为0.15％，六氟异丙醇的体积百分数为2.5％，其余为水。

进一步地，所述B相为甲醇。

进一步地，所述方法中，洗脱条件如下：