[发明专利]用于皮肤再生及伤口治愈的含有诱导的外泌体的组合物在审
申请号: | 201910945374.3 | 申请日: | 2019-09-30 |
公开(公告)号: | CN111073882A | 公开(公告)日: | 2020-04-28 |
发明(设计)人: | 李镕丞 | 申请(专利权)人: | 金贤锡 |
主分类号: | C12N13/00 | 分类号: | C12N13/00;C12N5/071;A61K35/36;A61P17/00;A61P17/02 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 吕琳;宋东颖 |
地址: | 韩国京畿*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 皮肤 再生 伤口 治愈 含有 诱导 外泌体 组合 | ||
本发明公开了具有皮肤再生及伤口治愈效果的外泌体的制备方法,该方法包括:向细胞直接/间接提供超声波刺激的步骤;以规定时间培养上述细胞及培养基的混合物的步骤;以及从上述混合物分离外泌体的步骤,其中,直接提供刺激是指向含有细胞的培养基施加超声波刺激,间接提供刺激是指向未含有细胞的培养基施加超声波刺激之后,混合上述培养基和上述细胞。这种外泌体的制备方法可从体细胞中获取具有皮肤再生及伤口治愈效果的大量的外泌体,其可诱导皮肤再生及伤口治愈的多种因子。外泌体具有基于磷脂的膜结构,容易渗透毛孔,由此递送物质的效率高,故可以有效地诱导皮肤再生及伤口治愈,没有使用合成药品时出现的副作用。
技术领域
本发明涉及一种具有皮肤再生及伤口治愈效果的外泌体(exosome)、其制备方法以及含有上述外泌体的组合物。
背景技术
就作为人体中最大组织的皮肤而言,除了具有接收感觉、合成维生素D、参与体温调节及免疫监视的多种功能之外,作为提供对于疾病及水分蒸发的保护膜的基本的第一道防线而起到重要作用。皮肤的伤口治愈是伴随有止血(hemostasis)、炎症(inflammation)、增殖(proliferation)及重塑(remodeling)的四个步骤的复杂的步骤。在从伤口形成开始数小时内发生的第一个步骤中,发生血液凝固(clotting)及形成临时的伤口基质(provisional wound matrix)的步骤,经过第一个步骤而被激活的炎症步骤中,通过噬中性粒细胞(neutrophil)募集、单核细胞(monocyte)的参与及变性来去除病原体及坏死组织。增殖步骤中,发生肉芽组织(granulation tissue)生成、血管网恢复、向成纤维细胞(fibroblast)表面的移动、再上皮化(reepithelization)、新生血管生成(angiongenesis)等,从伤口形成的21日开始延续至一年以上的成熟(remodeling)步骤中,在增殖步骤中活跃进行的过程缓慢停止,例如,肉芽组织的形成通过细胞凋亡(apoptosis)缓慢停止等,在增殖步骤中大量生成的III型胶原由更坚韧的I型胶原所代替,肌成纤维细胞多重连接在胶原上,减少疤痕面积。在上述过程中,如果至少有一个步骤没有发挥出适当的作用,则伤口的治愈会延迟或者能使伤口慢性化,在这种情况下,尤其会对作为第一道防线的作用会产生严重的问题,相反,即使实现治愈,也可能由于疤痕增生等而导致外形上的问题。
皮肤附属结构(skin appendages)包括毛根、皮脂腺、手指甲及汗腺。大伤口的治愈过程按物种而有所差异。对于鱼类及两栖类等低等脊椎动物而言,包括鳞、分泌腺等皮肤附属结构的皮肤的再生会非常完整。相反,就哺乳类而言,除了在胚胎阶段之外,皮肤不会完整再生,从而会生成没有皮肤附属结构的疤痕组织,使得无法正常地执行皮肤附属结构的功能(与额外的保护、保温及感觉相关),因此,在美容及心里方面,导致了生活质量的降低。
生物体来源的蛋白质、基因、细胞等作为原料的药品(生物药品(biologics)),与合成药品不同,不会在体内产生代谢产物,由此毒性较低,并且选择性地作用于疾患的病因,从而效果好,副作用较少。最近,随着这种优点受到关注,正在开发以皮肤再生及伤口治愈为目的的生物药品,尤其重点开发利用干细胞的方法,其中,公开了利用干细胞本身、其提取物或培养液的方法等。但是,就利用干细胞的上述组合物而言,共同具有效率性及经济性差的问题(该问题由苛刻的细胞的分离及扩增而导致)。并且,对于干细胞治疗剂而言,存在转移为癌症等风险,而就干细胞提取物而言,从细胞中提纯活性成分并不容易,存在需付出较多的费用和时间的缺点,且对于干细胞培养液而言,除了活性成分之外,还含有从细胞中分泌的排泄物或为了防止污染而添加的抗生素及血清等(这些为未验证用于人体时的风险的物质)。
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