[发明专利]一株促进药用石斛种子萌发形成幼苗的蜡壳耳目真菌菌株及其应用

说明书

本发明公开一株促进药用石斛种子萌发形成幼苗的蜡壳耳目真菌菌株Sebacinales sp.LQ，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC NO:M 2019744，本发明提供了该菌株的形态学及其生理生化特征。根据形态学、生理生化、核苷酸序列及系统发育分析结果表明，Sebacinales sp.LQ属于蜡壳耳目的一株真菌，该菌株可用于促进铁皮石斛种子和曲茎石斛种子萌发形成幼苗，具有较强的专一性，可利用蜡壳耳目真菌菌株分别接种铁皮石斛种子与曲茎石斛种子获取优质的共生种苗，实现共生萌发的高效培育种苗，可用于苗圃育苗或野外树干种子直播，相对于组织培养具有成本低廉，野外成活率高，无组织退化问题等优点，具有代替组织培养获得共生种苗的应用价值。

技术领域

本发明涉及一株促进药用石斛种子萌发形成幼苗的蜡壳耳目真菌菌株及其应用，属于应用微生物领域。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale)和曲茎石斛(Dendrobium flexicaule)作为我国传统名贵中药材，有着极高的药用价值，已有2000多年的使用历史，被誉为“中华九大仙草之首”和“还魂草”。过去以采集野生石斛为主，由于野生资源枯竭，从上世纪90年代开始石斛产业以大棚集约化栽培为主，通过近30年的发展，这样的产业模式由于基础设施投入巨大、种植技术要求高、产品安全性和道地性受到质疑等问题。目前整个药用石斛产业处于转型期，生态栽培已被业界认为是石斛产业发展的方向。

由于兰科植物种子本身的生物学特性：种子非常细小仅有发育不完全的胚，在自然条件下种子萌发需要依靠特定的共生真菌来获取营养物质。目前兰科植物种子的萌发，多采用人工培养基在无菌条件下进行非共生萌发，萌发率虽高，但在进行濒危种类野外回归时，非共生萌发(无菌萌发)幼苗移植到自然环境中存活率较低，并且由于无法与自然界中的真菌建立共生关系从而导致后续生长严重受阻。而通过种子和真菌的共生萌发获得的幼苗在回归到自然生境后具有较好的环境适应性。因此获得促进种子萌发的有效共生真菌是进行珍稀濒危兰科植物保护的第一步，也是开展生态栽培的关键环节。有效真菌的获得目前多采用从兰科植物野生植株的根中分离，但由于兰科植物根中存在着大量作用未知的内生真菌，这使得种子萌发有效真菌的筛选和分离变得复杂而繁琐。

发明内容

本发明克服了现有技术的不足，提供了一株促进药用石斛种子萌发形成幼苗的蜡壳耳目真菌菌株及其应用，该菌株已于2019年9月23日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO:M 2019744。

本发明所述蜡壳耳目真菌菌株Sebacinales sp.LQ，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

本发明所述蜡壳耳目真菌菌株Sebacinales sp.LQ，其nrDNA ITS序列提交美国国立生物技术信息中心数据库(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)保存，其Genbank号为：MN173026.1；进行BLAST比对，鉴定结果表明该菌株与其与MH348615.1真菌Sebacinalessp.最为相似，最大相似度达到98.38％，以及系统发育分析结果表明其分类上属于蜡壳耳目的一株真菌(如图1所示)。

本发明所述分子生物学鉴定涉及的真菌总DNA提取采用CTAB法；PCR扩增所用引物为真菌通用引物ITS4和ITS5；PCR反应体系和条件参照相应的产品说明书进行；扩增产物送上海生工生物工程有限公司测序；在美国国立生物技术信息中心数据库对所测序列进行比对分析，结合形态学特征确认其分类学地位。

本发明中所述的蜡壳耳目真菌菌株Sebacinales sp.LQ的分离：

(1)原球茎的获得：2018年9月在重庆罗田铁皮石斛和曲茎石斛的原生境采集到自然萌发的24颗铁皮石斛原球茎和3颗曲茎石斛原球茎，用湿润苔藓包裹好后带回；