[发明专利]一种新优花卉红冠桉组培快繁方法

权利要求书

1.一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

C1：外植体预处理

剪除多年生红冠桉母树枝条，待剪除部位的新生枝条萌芽生长45天后，采集半木质化新生枝条，切取新生枝条茎尖以下一节长5cm且带一个芽的茎段，作为外植体备用；

C2：外植体表面消毒

将步骤C1中的外植体用自来水冲洗15min后，在无菌超净台内依次用无菌水浸泡1min、10％次氯酸钠溶液消毒5min、无菌水冲洗3～4次，然后在浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡4～5min后用无菌水冲洗4～5次，得到消毒后的外植体；

C3：芽诱导

将经步骤C2处理之后的外植体接入芽诱导培养基中培养15～20天，得到芽诱导后的外植体；

C4：获得丛生不定芽

切取经步骤C3处理之后的外植体上的长度大于2cm的单个无菌腋芽，将单个无菌腋芽切成0.5～1cm的腋芽茎段，将腋芽茎段转接至多芽体诱导培养基上培养25～30天后获取体积不小于1cm³的多芽体，将多芽体切成体积为0.5cm³的小芽块，将小芽块转接至丛生不定芽增殖分化培养基中培养25～30天后获得嫩茎长度大于2cm的丛生不定芽，经上述反复循环5代以获得大量的丛生不定芽；

C5：生根培养

从经步骤C4处理之后得到的丛生不定芽中切下单芽高度不小于3cm的嫩茎，将嫩茎转入生根苗培养基中培养，在自然光照和28～32℃的恒温条件下培养20～30天以诱导不定芽生根，从而获得生根苗；

C6：炼苗与移栽

将步骤C5中获得的生根苗移至室外大棚中培养10天后得到组培苗，将组培苗移至组培瓶中炼苗，将用于培养组培苗的组培瓶的瓶盖拧松炼苗1天后，向组培瓶中添加少量的自来水，随后掀盖炼苗2天，从组培瓶中取出组培苗并移栽至红壤基质上，移栽过程中边移植边浇水，移栽20天后统计各栽培基质幼苗的成活率，随后降低遮荫度并按常规幼苗管理方式进行管理。

2.根据权利要求1所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C3中的芽诱导培养基为改良MS培养基，具体为MS培养基中附加有0.5mg/L 6-BA、20～30g/L蔗糖和8～9g/L卡拉胶。

3.根据权利要求1所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C4中的多芽体诱导培养基为改良MS培养基，具体为MS培养基中附加有3mg/L 6-BA和0.5mg/L ZT。

4.根据权利要求1所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C4中的丛生不定芽增殖分化培养基为改良MS培养基，具体为MS培养基中附加有0.2～0.8mg/L 6-BA、0.02～0.06mg/L IBA、0～0.03mg/L ZT、20～30g/L蔗糖、6～8g/L卡拉胶、0～0.03mg/LNAA和2％新鲜椰子水。

5.根据权利要求4所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C4中的丛生不定芽增殖分化培养基中附加的6-BA为0.8mg/L，IBA为0.04mg/L，ZT为0.03mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C5中的生根苗培养基为改良MS培养基，具体为MS培养基中附加有0.2～0.5mg/L IBA、0.1～0.2mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、6～8g/L卡拉胶和6ml/L 200倍EDTA-Fe母液。

7.根据权利要求6所述的一种新优花卉红冠桉组培快繁方法，其特征在于，步骤C5中的生根苗培养基中的IBA为0.5mg/L，NAA为0.2mg/L，同时步骤C5中的生根苗培养基中还添加有200倍铁盐母液6～10mL/L。