[发明专利]一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白的注射制剂

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体提供了一种人白细胞介素10‑Fc融合蛋白的注射制剂，该制剂包括人白细胞介素10‑Fc融合蛋白、缓冲盐、蛋白保护剂、等渗透调节剂、非离子型表面活性剂；其中，制剂的pH值为5.0‑6.0。本发明提供的注射制剂具有稳定性更好、制备工艺简单、成本低廉、无需特殊设备和苛刻条件、易于规模化生产等优点；本发明制剂中的人白细胞介素10‑Fc融合蛋白通过连接肽将人白细胞介素10与免疫球蛋白IgG的Fc部分融合而成，延长了人白细胞介素10在生物体内的半衰期，增加了人白细胞介素10在体内的稳定性，有利于其在疾病治疗中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白的注射制剂。

背景技术

白细胞介素-10(IL-10)是1989年被发现的一种细胞因子，自从其被发现以后，很多研究深入剖析了这个细胞因子的生物学特性。人类IL-10是一个35KD的二聚体，由两个单体通过非共价键形式结合，在单体内有两个二硫键来维持因子的结构和生物学活性，在连接其2个单体亚基的非共价相互作用破坏后成为生物学上失活的。

IL-10是一种多细胞源(巨噬细胞、单核细胞、T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞及肥大细胞等均可表达)、多功能、多向性的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。IL-10可通过抑制活化的单核细胞和活化的巨噬细胞的IL-1、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达来抑制免疫应答；IL-10可抑制TH1淋巴细胞产生的细胞因子如IL-2及IFN-γ的合成，抑制TH2淋巴细胞产生IL-4和IL-5；同时近年来研究发现Treg细胞和IL-10的免疫抑制作用有关，肿瘤相关的CD4+Treg细胞和CD8+Treg细胞均可以产生IL-10并抑制肿瘤相关抗原特异性T细胞的免疫应答。由此看见，IL-10可以通过多种细胞发挥免疫抑制作用，诱导肿瘤免疫逃逸。

多年来，人们对IL-10的认识主要集中在免疫抑制方面，而忽视了它的免疫刺激作用，尤其是它对胸腺细胞、B细胞和肥大细胞的活化作用。近年来，不断有研究表明IL-10的免疫活化作用对于肿瘤的抑制起到了至关重要的作用，研究表明聚乙二醇化IL-10对移植瘤有排斥作用，并可提高颗粒酶B和IFN-γ的表达。IL-10不仅可以通过提高NK细胞的细胞毒性活性增强肿瘤杀伤效应，还可以通过介导肿瘤内特异性细胞毒性CD8+T细胞的浸润和激活、IFN-γ和颗粒蛋白酶的表达和增强肿瘤抗原提呈等而提高瘤内CD8+T细胞的肿瘤杀伤能力和IFN-γ诱导的抗原提呈能力，从而提高机体的肿瘤杀伤效应。

作为一种多功能的细胞因子，IL-10已与众多疾病、病症和病状包括炎性病状、免疫相关疾病及癌症关联。IL-10的双向免疫调控作用为肿瘤免疫治疗提供了新的思路与方向。但重组人IL-10在体内半衰期只有2个小时，很快会被清除，这将严重影响了其在疾病治疗中的应用，为了克服重组人IL-10半衰期短的问题，目前有些研究机构采用PEG化修饰方法延长其在体内的半衰期，但是PEG化修饰位点较多，人IL-10经过PEG化修饰后产物不均一，这给生产工艺和质量控制带来了很大的难度。同时，还有一些研究者开始研究人白细胞介素10-Fc融合蛋白，但是人白细胞介素10-Fc融合蛋白的结构设计及合适的用药剂量、生产工艺和质量控制都将面临巨大的挑战，目前为止，还没有人IL-10-Fc融合蛋白处于临床开发阶段。

此外，和大多数蛋白分子一样，人白细胞介素10-Fc融合蛋白具有不稳定性，会经历多种化学和物理降解，尤其是人白细胞介素10-Fc融合蛋白的高级结构非常脆弱，在运输、保存和使用过程中很容易发生构象变化，如变性、聚集和沉淀，这些降解及聚集的产物会对生物制药的安全性产生很大的影响，特别是一些蛋白聚集物会激发人体的免疫反应，轻者会降低生物药物的疗效，重者甚至会造成病人的死亡。为此，急需开发一种不仅能够在生产中得到高纯度的人白细胞介素10-Fc融合蛋白产品，而且能够保证融合蛋白在运输、储存和使用过程中保持结构长期稳定性的注射制剂。

发明内容