[发明专利]与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用

说明书

本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

技术领域

本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。

背景技术

基于蛋白的三维结构和电荷分布特性，采用分子虚拟对接技术筛选亲和肽已经成为多肽类配体和药物理性设计的重要技术手段。该方法主要是借助于计算机软件的快速运算，实现小分子多肽在靶标蛋白活性位点上的逐一对接，这些小分子多肽来自于事先准备好的虚拟肽库，然后经过连续优化靶标蛋白的空间构象、氨基酸残基侧链等方面，找到小分子多肽与靶标蛋白最优的结合构象，计算出小分子多肽与生物大分子蛋白相结合的方式与亲和力，并且对结果进行打分，根据打分结果挑选出最佳配体，然后将最佳配体进行体外实验验证和筛选。

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease virus,IBDV)引起的一种严重危害雏鸡免疫器官，致使雏鸡免疫失败，造成B淋巴细胞严重受损的高发性、高接触性的病毒性传染病。该病于上世纪八十年代开始在我国广泛流行，给我国的养禽业带来巨大经济损失。其主要特征是IBDV侵袭雏鸡的中枢免疫器官法氏囊，IBDV在法氏囊B淋巴细胞中大量增殖，对法氏囊B淋巴细胞造成严重杀伤，从而导致严重的免疫抑制，鸡群机体免疫力下降，使疫苗免疫失效，给禽养殖业的疫病防控带来巨大挑战。VP2蛋白位于病毒粒子的外表面，是IBDV的主要结构蛋白，其蛋白分子量约为37～40kDa，占结构蛋白总量的51％。VP2不仅是IBDV的主要宿主免疫保护性抗原，也是IBDV基因组A节段发生抗原变异的主要区域。因此，VP2蛋白对IBDV的抗原性和毒力的变异具有重要作用，和病毒的细胞嗜性、致病性、细胞凋亡等密切相关。VP2蛋白是唯一的衣壳蛋白，含有中和性抗原表位，可刺激机体产生中和抗体。因此目前研发的亚单位疫苗主要以VP2蛋白作为主要抗原基因。

发明内容

本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SEQ ID NO.1：SERWDN，即IBDVL9-15。固相合成法合成多肽IBDVL9-15，利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振(LSPR)试验，结果表明，IBDVL9-15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，由此证明，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列，所述的多肽序列为SERWDN。

所述的的多肽序列，包括以所述的多肽序列为核心，任何对该多肽序列所进行的相应调整或修饰；修饰材料包括但不限制在纳米材料、荧光材料、酶类、生物素及特定的蛋白质上。

所述的多肽序列在禽法氏囊病毒VP2蛋白的快速检测、纯化和疫苗中的应用。

将所述的多肽序列用于禽法氏囊病毒VP2蛋白的鉴定，其中包括但不局限于酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。

所述的多肽序列在对禽法氏囊病毒VP2蛋白抗原进行定量和定性检测中的应用。

本发明的有益效果：