[发明专利]海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存中的应用

说明书

本发明公开了一种海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存中的应用，尤其是5%～10%海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存中的应用，尤其是10%海藻糖作为保护剂在羊肚菌菌株、猴头菇菌株、鲍鱼菇菌株和木耳菌株液氮冷冻保存中的应用。本发明的优点在于充分利用海藻糖可在细胞表面形成保护膜的特性，将海藻糖作为保护剂用于食用菌菌种的液氮冷冻保存，海藻糖作为保护剂能够冷冻保存的菌种种类远远多于传统的甘油保护剂，适用菌种种类多。

技术领域

本发明涉及食用菌液氮保藏领域，尤其是涉及海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存中的应用。

背景技术

在微生物领域，无论是基础科研还是生物技术的应用研究，都需要保证菌种的质量和活力，通过研究挖掘微生物的应用价值，让其不断“升值”。食用菌是可供人类食用的大型真菌，种类繁多，有2000余种，能大面积人工栽培的食用菌就有60余种。由于食用菌在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，导致造成菌种衰退，甚至导致优良菌种丢失，因而，常需要将菌种进行保藏，以尽可能保持其原有性状和稳定的活力，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，保持菌株优良性状不退化，保持优良菌株存活，以满足研究、交换和使用等诸方面的需要。

目前，食用菌菌种的保藏方式主要有菌丝保藏法和孢子保藏法两种，因孢子保藏法较为复杂，在实际生产中常用菌丝保藏法。菌丝保藏法包括定期移植法、矿油封藏法、单子菌菌丝液体保藏法、甘油低温保藏法、冷冻真空干燥法和液态氮超低温冻结法等。液氮超低温冻结法是将保存的菌株密封在冻存管内，加入冷冻保护剂，冻存管预冷至-40℃后放入-196℃的液氮罐内，以实现菌种的长期保存。

液氮超低温冻结法能够适用于多种微生物，因而已经被国内外保藏机构所采用。对液氮低温冻结法来说，每种菌种冷冻保存后的存活率要求≥80%。冷冻保护剂是影响菌株冻存存活率的重要因素，甘油为食用菌菌株液氮冻存常用的保护剂，在保藏时需要经过程序降温后才能将菌种放入液氮罐内，否则根本无法保证菌种的成活率。同时甘油保护剂适用的菌种种类很少，难以满足不同菌种的液氮冷冻保存需求。

海藻糖是由两个葡萄糖分子以1,1-糖苷键构成的非还原性糖，是一种安全、可靠的天然糖类，广泛存在于动植物体和微生物体中，如人们日常食用的蘑菇类、海藻类、豆类、虾米、啤酒以及酵母发酵食品中均匀较高含量。海藻糖在高温、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下，可在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生物体的生命特征，因而已被广泛用于食品保鲜技术和医疗领域，如在海鲜上喷洒海藻糖溶液于-16℃冷冻保存，不仅可以保证海鲜的硬度、伸缩性，还能够提高海鲜的口感，又比如海藻糖作为诊断工具酶等生物试剂的稳定剂，可将诊断工具酶置于常温条件或高温条件（70℃）干燥保存。但是将海藻糖作为食用菌菌种液氮冷冻保存用保护剂则在国内外尚未见报道。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术所存在的不足而提供一种海藻糖的新用途：即海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存方面的应用。

进一步的，本发明还提供：

5%～10%海藻糖作为保护剂在食用菌菌种液氮冷冻保存中的应用。

5%海藻糖和10%海藻糖作为保护剂在平菇菌株液氮冷冻保存中的应用。

10%海藻糖作为保护剂在羊肚菌菌株、猴头菇菌株、鲍鱼菇菌株和木耳菌株液氮冷冻保存中的应用。

10%海藻糖作为保护剂在香菇菌株、草菇菌株、白灵菇菌株、灵芝菌株和灰树花菌株液氮冷冻保存中的应用。

使用时，将待保藏的食用菌菌株放入冷冻管内，向冷冻管内加入海藻糖，盖盖密封后，直接将冷冻管放入-196℃液氮罐内冷冻保存。