[发明专利]一种水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的特异性分子标记引物及应用有效
| 申请号： | 201910949395.2 | 申请日： | 2019-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN111187851B | 公开（公告）日： | 2023-03-07 |
| 发明（设计）人： | 韦新宇;曾跃辉;黄建鸿;张锐;尚伟 | 申请（专利权）人： | 三明市农业科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 泉州市博一专利事务所(普通合伙) 35213 | 代理人： | 方传榜 |
| 地址： | 365509 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水稻 稻瘟病 抗性 基因 pi kf2 特异性 分子 标记 引物 应用 | ||
1.一种水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的特异性分子标记引物，其特征在于，包括：
序列表SEQ ID NO.1核苷酸序列的引物：SPikf-F：AGTGGAAGCATATCTCTATCTCT；
序列表SEQ ID NO.2核苷酸序列的引物：SPikf-R：TCATCTCAGGTTAGCATGCG。
2.一种如权利要求1所述的水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的特异性分子标记引物的应用，其特征在于：应用于水稻抗性育种。
3.一种鉴定水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1) 提取水稻叶片的基因组DNA，并以该基因组DNA为模板，采用引物SPikf-F和SPikf-R对该基因组DNA进行PCR扩增；其中，
SPikf-F：AGTGGAAGCATATCTCTATCTCT；
SPikf-R：TCATCTCAGGTTAGCATGCG；
2) 对步骤1获得的扩增产物进行8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化，以区分水稻亲本材料及其后代植株是否含有Pi-kf2(t)稻瘟病抗性基因，含有稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的水稻基因组DNA能扩增出226bp和218bp两条不同分子量大小的特异性条带，含有其他Pi2/Pi9位点功能抗病基因或不含抗病基因的材料仅能扩增出一条分子量大小为226bp、218bp或208bp的单一条带。
4.如权利要求3所述一种鉴定水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为10 μL的体系：5.0 μL PCR MasterMix，0.5 μL SPikf-F引物，0.5μL SPikf-R引物，0.8 μL DNA模板，3.2 μL ddH2O。
5.如权利要求4所述一种鉴定水稻稻瘟病抗性基因Pi-kf2(t)的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94.0℃预变性5 min； 94.0℃变性30 S，56℃复性30 S，72℃延伸1 min，35个循环；72℃延伸7 min，4℃保存。
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