[发明专利]一种重组人纤连蛋白肽

说明书

本发明属于基因工程领域，更具体地公开了一种重组人纤连蛋白肽。本发明公开的是密码子优化的重组人纤连蛋白肽基因，通过基因工程的方法在体外进行表达纯化。本发明提供的利用大肠杆菌作为表达宿主细胞，提供一种分子量小，且保留了纤连蛋白原本特性，可促进细胞生长，提高细胞贴壁率，增强细胞代谢水平的重组人纤连蛋白肽。

技术领域

本发明涉及到基因工程领域，具体地说，涉及一种重组人纤连蛋白肽的制备方法。

背景技术

纤维连接蛋白（简称纤连蛋白）又称纤维结合蛋白、粘连蛋白、纤粘蛋白，英文名fibronectin，英文缩写Fn。纤维结合蛋白主要由肝脏及血管内皮细胞生成，广泛存在于动物组织和组织液中，是一种大分子糖蛋白，二聚体分子量约为450KD，具有多种生物活性。Fn分子在进化过程中保守性很强，各种动物体液中的Fn具有非常相近的结构、性质和生物学功能，因而不同来源的Fn可以相互替代使用。纤连蛋白可促进细胞生长，提高细胞贴壁率，增强细胞代谢水平，缩短细胞生长时间，提高杂交瘤技术中细胞融合率等。

然而现有的纤连蛋白由于分子量过大加工性较差，并且大多从动物组织中提取，是一种异源蛋白，具有一定的排斥反应，同时具有潜在的携带病原体危害人体的风险。通过基因重组及生物工程技术直接生产出结构、特性、生物学功能与人类纤连蛋白极为相似的重组人纤连蛋白肽，不仅解决现有的纤连蛋白分子量过大，加工性较差的缺点，而且能够减少排异反应，规避感染疾病的风险，同时保留了人纤连蛋白的优良生物学性能。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种分子量小，且保留了纤连蛋白原本特性，可促进细胞生长，提高细胞贴壁率，增强细胞代谢水平的重组人纤连蛋白肽。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种重组人纤连蛋白肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在上述的重组人纤连蛋白肽中，其还包括用于蛋白纯化的His标签。

编码上述重组人纤连蛋白肽的核酸，并进行大肠偏好密码子优化，优化序列有SEQID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4；优选为SEQ ID NO.2。其还包括用于蛋白纯化的His标签。

一种用于表达上述重组人纤连蛋白肽的载体，为pET-28a、pET-20b或pQE-30。

一种宿主细胞，其包括上述的表达载体，为M15或BL21(DE3)。

一种上述重组纤连蛋白的制备方法，包括如下步骤：（1）在宿主细胞中表达根据权利要求3或4或5所述的核酸；（2）收集和/或纯化所述重组人纤连蛋白肽。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明截取纤连蛋白氨基酸序列第12~14区域，得到了分子量小，且保留了纤连蛋白原本特性的重组纤连蛋白，可促进细胞生长，提高细胞贴壁率，增强细胞代谢水平。本发明获得的重组纤连蛋白兼具纤连蛋白的特性，能使创伤面修复再生，复配以适当辅料后，可进一步制备成冻干粉剂、纳米微球、纳米脂质体、水剂、凝胶等半固体制剂，作为活性添加剂应用于组织工程、药学以及美容护肤领域。该重组纤连蛋白具有人源化，免疫原性低，不易发生过敏反应的突出优点。同时也可以作为组织工程、药学或美容护肤领域的活性添加剂。

附图说明

图1为大肠杆菌重组表达质粒pET20b-Fnp的构建图谱。

图2 为重组蛋白Fnp基因片段扩增。泳道1为DL2000DNAmarker；泳道2表示扩增的重组蛋白Fnp基因，约840bp；泳道3为阴性对照。