[发明专利]一种木薯CAMTA基因及其抑制表达载体的构建和抗病应用

权利要求书

1.pTRV2-MeCAMTA基因沉默载体在抗木薯细菌性萎蔫病中的应用，所述木薯细菌性萎蔫病是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. manihotis）所引起的，所述pTRV2-MeCAMTA基因沉默载体的构建方法如下：

（1）以木薯CAMTA基因5’端1-600 bp的基因片段作为病毒诱导基因沉默体系特异性核酸沉默片段，选用BamHI和SmaI酶切位点设计引物CAMTA-F和CAMTA-R；

（2）以华南124号木薯cDNA为模板进行PCR扩增，得到600 bp的PCR产物，PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，用胶回收试剂盒回收目的片段，将目的片段连接到pEASY-Blunt3载体，转化到大肠杆菌DH5α，涂布于含有氨苄抗性的LB固体培养基，培养后挑选单菌落进行PCR检测，将PCR检测的得到的阳性克隆菌液测序；

（3）测序比对正确后，提取pEASY-Blunt3-MeCAMTA质粒，用BamHI和SmaI酶切得到600bp目的片段，得到的片段胶回收后，4℃过夜连接到经同样双酶切线性化的空载体pTRV2上，转化到大肠杆菌DH5α中，涂布于含有卡纳抗性的LB固体培养基，培养后挑选单菌落进行PCR检测，将PCR检测的得到的阳性克隆提取质粒，用BamHI和SmaI酶切验证，得到pTRV2-MeCAMTA基因沉默载体；

步骤（1）中所述的CAMTA-F和CAMTA-R引物序列如下：

CAMTA-F：5’-CGCGGATCCATGGCTGGTCGCGGATCGTATGGA-3’

CAMTA-R：5’-TCCCCCGGGATTACTCTGCATTTGTGGTGACTC-3’。

2.根据权利要求1所述pTRV2-MeCAMTA基因沉默载体在抗木薯细菌性萎蔫病中的应用，其特征在于，将转有pTRV2-MeCAMTA基因沉默载体的农杆菌菌液注射在木薯叶片背面。