[发明专利]一种用于BKV的组织原位杂交诊断和检测体系及其应用

说明书

本发明涉及基因诊断技术领域，具体公开一种用于BKV的原位核酸诊断和检测体系，包括用于检测BKV的探针，所述探针的序列分别为如SEQ ID No:1～40所示的序列或其互补链。本发明还公开该体系在制备BKV的诊断或检测试剂/试剂盒中的用途。本发明BKV的组织原位杂交诊断和检测体系灵敏度高、特异性好，可用于精准诊断BKV的活化以指导临床对症用药，提高BKV组织诊断的灵敏度和特异度。本发明的BKV原位杂交技术应用，将会大大提高BKV组织诊断的灵敏度和特异度，降低BKV相关疾病带来的危害，具有广阔的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及基因诊断技术领域，具体地说，是一种用于BKV的原位核酸诊断和检测体系及其应用。

背景技术

原位杂交(In-Situ Hybridization,ISH)是利用核酸分子探针定量和定位固定组织和细胞中特定核酸(DNA和RNA)靶标的技术，能够获得与基因表达和遗传位点相关的时间和空间信息，是临床常用的组织诊断方法之一。免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是组织诊断中最常用的方法，是利用抗原抗体特异性结合的原理，通过抗体标记进行呈色反应，对相应抗原(即蛋白)进行定性、定位、定量测定的一项技术。BK多瘤病毒(BKpolyomavirus，BKV)，是一类在免疫低下人群中容易引起严重的泌尿系统疾病的机会性感染病毒。目前，从专利检索系统中未检测到BKV相关的免疫组化或原位杂交专利。在科研文献中有大量的关于BKV免疫组化的诊断方法，但关于BKV原位杂交报道极少。

BKV属于多瘤病毒科。目前，临床上BKV的组织诊断采用免疫组化的方法，针对BKV的大T抗原，抗体则是用猴多瘤病毒SV40大T抗原的抗体交叉识别。因此，这一检测技术存在如下不足：1)特异性差，容易导致误判。也就是说，无论BKV、SV40，抑或BKV的近亲JC病毒(JCV)等其他多病毒瘤，都能被此抗体识别，检测结果无法判定到底是哪一种多瘤病毒。不同的多瘤病毒的致病性以及治疗方案存在差异，因此要求组织诊断具有特异性，以对症用药。2)灵敏度差，容易导致漏判。灵敏度不足是免疫组化检测的通病。BKV主要影响肾移植等器官移植受者，其组织诊断的特殊性在于，BKV活化导致的组织炎症症状与器官急性排斥导致的炎症非常类似，而应对二者的免疫抑制方案却完全相反。因此一旦BKV相关肾炎漏判为BKV假阴性，会被判定为急性排斥，则需要加大免疫抑制强度，会导致BKV相关肾炎症状加重而引起移植肾失功等严重后果。目前，文献中有零星的关于BKV原位杂交诊断的报道，但靶向位点由于未限制在基因编码区以内，或仅考虑BKV保守区域而未考虑特异区域，导致只能针对DNA(量少)的灵敏度差的问题；或探针同时靶向BKV、JCV和SV40而无法区分等特异性差的问题。

发明内容

BKV是一种潜伏感染的机会性病毒，在人群中分布十分广泛，成人IgG抗体阳性率达90％以上。一旦机体免疫力下降，如服用免疫抑制剂、感染HIV、怀孕以及罹患癌症等，BKV容易活化而引起严重的泌尿系统疾病，包括：1)引起～6％的肾移植受者发生BKV相关肾病(BKVAN)，即使在治疗情况下，BKVAN仍能导致16-40％的移植肾失功；2)引起～10％左右的造血干细胞移植受者发生出血性膀胱炎；3)BKV的活化增加了一些肿瘤如膀胱癌的发生和转移风险。由于缺乏有效的抗病毒药物，对器官移植受者来说，降低免疫抑制强度是唯一有效的抗BKV方案，而这又带来器官排斥的风险。目前，虽然血、尿荧光定量PCR诊断结果也能作为判断BKV活化的参考依据，但组织诊断才是判断BKVAN的金标准，目前普遍采用组织免疫组化大T抗原阳性作为标准。