[发明专利]一种快速定量检测RNA加帽效率的方法在审
| 申请号： | 201910951836.2 | 申请日： | 2019-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN112626177A | 公开（公告）日： | 2021-04-09 |
| 发明（设计）人： | 朱斌;成锐;夏恒;黄锋涛;吴慧;陆雪玲;闫艳;余兵兵;王雄略;蒋怡心 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学;深圳华中科技大学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6809 | 分类号： | C12Q1/6809 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 徐瑛 |
| 地址： | 430075 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 定量 检测 rna 效率 方法 | ||
1.一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，由以下步骤组成：
S1.体外转录合成未加帽的RNA，并除去模板DNA；
S2.对步骤S1得到的所述RNA进行加帽处理；
S3.对加帽处理后的RNA进行单磷酸化处理：先利用碱性磷酸酶进行去磷酸化，RNA纯化后再利用多聚核苷酸激酶在RNA的5’端加上单磷酸；
S4.用单磷酸酶处理步骤S3中所述的进行单磷酸化处理后的RNA，并设置不用单磷酸酶处理的对照组；
S5.跑胶检测，定量测定上述用单磷酸酶处理的RNA的条带亮度(记为n)以及所述对照组的RNA的条带亮度(记为N)，计算出RNA的加帽效率为：(n/N)×100％。
2.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S1-S3后均需进行RNA纯化。
3.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S1具体包括：以纯化后的线性DNA作为模板，加入RNA聚合酶起始RNA的体外转录，得到未加帽的RNA，然后用DNA酶消化除去模板DNA。
4.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S2中所述加帽处理的方法为：利用加帽酶对RNA进行体外加帽。
5.根据权利要求4所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，所述加帽酶为牛痘病毒加帽酶。
6.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S2中所述加帽处理的方法为：在步骤S1所述的体外转录过程中，同时加入抗-反向帽类似物-ARCA进行共转录。
7.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S3中所述碱性磷酸酶为小牛肠碱性磷酸酶，所述多聚核苷酸激酶为T4多聚核苷酸激酶。
8.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S4中所述单磷酸酶为XRN-1。
9.根据权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法，其特征在于，步骤S5中利用ImageJ软件定量测定所述条带亮度。
10.一种权利要求1所述的一种快速定量检测RNA加帽效率的方法在RNA生产期间及RNA作为治疗产品的质量控制中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华中科技大学;深圳华中科技大学研究院，未经华中科技大学;深圳华中科技大学研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910951836.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
