[发明专利]乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的同源重组载体及应用

权利要求书

1.乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的同源重组载体，其特征在于，所述同源重组载体是以真核表达载体为骨架载体，所述同源重组载体中至少包括正筛选元件、负筛选标记基因、PEDV单链抗体基因表达盒以及rosa26基因的同源左臂和同源右臂；

其中，所述正筛选元件包括顺次连接的重组酶识别序列-正筛选标记基因-重组酶基因-重组酶识别序列；

所述正筛选元件的一端与所述同源左臂连接，另一端与所述PEDV单链抗体基因表达盒连接；所述PEDV单链抗体基因表达盒的另一端与所述同源右臂连接，同源右臂的外侧连接有负筛选标记基因。

2.根据权利要求1所述的同源重组载体，其特征在于，所述正筛选标记基因包括编码新霉素磷酸转移酶、潮霉素B磷酸转移酶、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶或嘌呤霉素乙酰转移酶的基因；所述负筛选标记基因包括编码白喉毒素或胸腺去氧核苷的基因；所述重组酶基因包括编码Cre酶或Flp酶的基因。

3.根据权利要求2所述的同源重组载体，其特征在于，所述正筛选元件为Loxp-OCT4启动子-Cre-PGK-Neo-Loxp。

4.根据权利要求1所述的同源重组载体，其特征在于，所述PEDV单链抗体基因表达盒为人乳铁蛋白hLF启动子-PEDV单链抗体基因-hLF终止子。

5.根据权利要求1所述的同源重组载体，其特征在于，所述同源重组载体包括如下顺次连接的元件：同源左臂-Loxp-OCT4启动子-Cre-PGK-Neo-Loxp-人乳铁蛋白hLF启动子-PEDV单链抗体基因-hLF终止子-同源右臂-PGK-dTA。

6.根据权利要求5所述的同源重组载体，其特征在于，所述同源左臂和同源右臂为来自于猪rosa26基因的同源左臂和同源右臂，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示；所述PEDV单链抗体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

7.根据权利要求1所述的同源重组载体，其特征在于，所述同源重组载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

8.乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的细胞系，其特征在于，利用权利要求1-7任一项所述同源重组载体转染哺乳动物体细胞，获得的中靶阳性细胞克隆，即为乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的细胞系。

9.权利要求1-7任一项所述同源重组载体或权利要求8所述细胞系在制备乳腺特异性表达PEDV单链抗体转基因动物中的应用，其中，所述动物包括猪。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将所述同源重组载体转染到与其同源臂DNA来源相同的猪细胞系中。