[发明专利]一种联合定量检测CRP与SAA的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及制备方法

说明书

本专利公开了一种联合定量检测CRP及SAA的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法；所述试剂盒包括荧光免疫层析试剂板、样本稀释液及血液采样装置；所述荧光免疫层析试剂板包含有样品垫，CRP、SAA、羊抗兔包被的荧光微球制备的荧光垫，抗CRP包被线、抗SAA包被线和兔抗质控包被线的硝酸纤维素膜；所述样本稀释液含表面活性剂。本发明的试剂盒，一次取样仅需3微升，三分钟内同时获取两个结果，能够检测指尖血与静脉血，精密度在10％以内，两个项目的最低检出限均小于0.1mg/L，线性范围可到300mg/L，与西门子的临床样本相关性r均在0.975以上。

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种同时定量检测CRP及SAA的时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法。

背景技术

C反应蛋白：(Creactive protein，CRP)CRP是急性时相反应蛋白，在感染发生后6-8小时开始升高，24-48小时达到顶峰。升高幅度与细菌感染的程度呈正相关。是鉴别细菌感染与病毒感染的指标，病毒感染时CRP一般不增高，但在自身免疫性疾病时也增高。临床应用相当广泛，包括急性感染性疾病的诊断和鉴别诊断，手术后感染的监测；抗生素疗效的观察；病程检测及预后判断等。

SAA全名血清淀粉样蛋白A，是一种由肝细胞产生后被分泌到血清中的一种急性时相蛋白，当机体发生感染或损伤时,可在4-6h内迅速升高约1000倍，当机体抗原清除后则迅速降低至正常水平。SAA是急性相蛋白，机体受感染后，4-6h内即可迅速升高约1000倍，清除病原体后又可迅速的降低至正常水平，是反映机体感染情况和炎症恢复的灵敏指标；SAA与目前临床最广泛使用的CRP相比较，有一个最重要的不同之处：SAA升高见于病毒、支原体、细菌感染，且敏感性高于CRP；CRP升高见于细菌感染，病毒及支原体等病原体感染不升高或仅轻微升高。

CRP、SAA联合检测可对早期细菌和病毒感染的鉴别诊断提供有力的数据，例如两者均增高细菌感染的趋向性较大；而CRP正常SAA明显增高者,结合临床对病毒性感染的趋向性诊断又多了一份依据。例如因物理因素所致的发热和病毒感染引起的感冒，两个病例同测WBC、 CRP，都可能是正常结果，因而不能鉴别诊断，但加测SAA指标后，SAA增高者结合临床症状提示病毒性感染可能性的证据更充分；特别在婴幼儿感染性疾病的早期，细菌和病毒感染确是很难鉴别，而SAA和CRP的联合检测比单独测CRP更有独特的意义，更有利于小儿感染性疾病的早期诊断,对细菌和病毒感染的初筛和鉴别诊断又多了一份依据，更能体现单项指标不能反映的增值意义，减少不必要的抗生素的应用,有利于病人的早日康复和预防耐药细菌形成。SAA联合CRP检测既可作为病毒感染的辅助诊断又可动态观察病情和疗效并能有效指导临床用药。因此被人们誉为病毒感染辅助诊断的王牌试验。

现有技术中也有报道定量联合检测CRP/SAA的免疫荧光层析试纸及试剂盒的方案，但上述方案存在着检测耗时长、检测需要血液样本量多、检测精密度较差等缺点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种联合定量检测C-反应蛋白(CRP)与血清淀粉样蛋白A(SAA)的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法和使用方法，与现有的联合检测CRP/SAA的免疫荧光层析试纸及试剂盒的方案相比较，具有检测耗时短、检测需要血液样本量少、检测精密度高的优点。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种联合定量检测CRP及SAA的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，包括：荧光免疫层析试剂板、样本稀释液和血液采样装置；

所述荧光免疫层析试剂板包含样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述荧光垫包被有缀合配对抗SAA单抗1的荧光微球、缀合配对抗CRP单抗1的荧光微球、和缀合羊抗兔抗体的荧光微球；所述硝酸纤维素膜上设有一条包被有抗CRP单抗2的CRP检测线、一条包被有抗SAA单抗2的SAA检测线和一条包被有兔抗体的质控线；