[发明专利]使用秸秆生产柠檬酸的废弃物制备牛蒡生物有机肥的方法

权利要求书

1.使用秸秆生产柠檬酸的废弃物制备牛蒡生物有机肥的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)原材料处理：将秸秆生产柠檬酸产生的废水和废渣的混合物进行灭菌处理；

(2)菌种活化：将解磷菌菌种、解钾菌菌种、固氮菌菌种及生防菌菌种分别经活化处理后得到解磷菌活化菌种子液、解钾菌活化菌种子液、固氮菌活化菌种子液及生防菌活化菌种子液；

(3)菌种驯化：将步骤(2)得到的固氮菌活化菌种子液、解磷菌活化菌种子液、解钾菌活化菌种子液和生防菌活化菌种子液分别进行驯化，得到能够承受步骤(1)得到的混合物的酸性环境的固氮菌驯化菌悬液、解磷菌驯化菌悬液、解钾菌驯化菌悬液及生防菌驯化菌悬液；

(4)高密度发酵：将步骤(3)制备得到的各菌驯化菌悬液共同接入至驯化菌高密度发酵培养基中进行发酵培养，5-8天后终止发酵，得到混合菌种；

(5)牛蒡生物有机肥的发酵：将步骤(1)的混合物与碳源混合均匀，得到发酵基质，然后接种步骤(4)发酵得到的混合菌种，并在25-35℃下，通入0.5-1.0vvm无菌空气，搅拌发酵24-36小时，得牛蒡生物有机肥肥料；

其中，碳源为葡萄糖、淀粉及蔗糖中的一种，碳源与混合物的质量比为3-5：100。

2.根据权利要求1所述的使用秸秆生产柠檬酸的废弃物制备牛蒡生物有机肥的方法，其特征在于，所述步骤(4)中驯化菌高密度发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：胰蛋白胨，12.5％；淀粉，5％；酵母膏，0.8％；葡萄糖，7％；乙酸钠，0.2％；磷酸二氢钾，0.1％；硫酸镁，0.02％；生物素，0.05％，余量为水。

3.根据权利要求1所述的使用秸秆生产柠檬酸的废弃物制备牛蒡生物有机肥的方法，其特征在于，所述步骤(2)中固氮菌活化所用固氮菌培养基由以下质量份数的原料组成：KH₂PO₄，0.2份；K₂HPO₄，0.8份；MgSO₄·7H₂O，0.2份；CaSO₄·2H₂O，0.1份；Na₂MoO₄·2H₂O，0.05份；酵母膏，0.5份；甘露醇，20份；FeCl₃，0.02份；蒸馏水，1000份。

4.根据权利要求3所述的使用秸秆生产柠檬酸的废弃物制备牛蒡生物有机肥的方法，其特征在于，所述步骤(3)中固氮菌的驯化过程为：

在第一固氮菌培养液中接种活化后的固氮菌种子液，在20-35℃下培养1-2天；再将在第一固氮菌培养液中培养后的固氮菌接种到第二固氮菌培养液中，在20-35℃下培养1-2天；最后将在第二固氮菌培养液中培养后的固氮菌接种到秸秆生产柠檬酸后的废水中，于20-35℃下培养1-2天，得到驯化固氮菌；并将所得的驯化固氮菌在无菌条件下离心、洗涤，菌体沉淀与水混合得到固氮菌驯化菌悬液；

所述第一固氮菌培养液由废水与固氮菌培养基按照4:6的体积比混合得到；所述第二固氮菌培养液由废水与固氮菌培养基按照7:3的体积比混合得到。