[发明专利]一种增强型合成Notch受体及其应用

权利要求书

1.一种增强型合成Notch受体，其特征在于，从N末端到C末端依次包括：

a.特异性识别抗原相关结构的细胞外识别结构域；

b.包含蛋白水解切割位点的Notch核心调节结构域；

c.RAM结构域；

d.细胞内转录调节结构域；

所述的RAM结构域长度为5～100个氨基酸，为人工序列或者源自天然RAM结构域，并且所述的RAM结构域含有至少一个或多个由疏水性氨基酸任意组合的二氨基酸对；所述的疏水性氨基酸选自色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸或酪氨酸；

所述的Notch核心调节结构域的蛋白水解切割位点包括一个或多个选自S1、S2或S3蛋白酶裂解位点中的配体诱导型蛋白酶裂解位点。

2.根据权利要求1所述增强型合成Notch受体，其特征在于，所述RAM结构域为含有三个连续的疏水性氨基酸的片段。

3.根据权利要求2所述增强型合成Notch受体，其特征在于，所述三个连续的氨基酸选自：LWF、LWL、LFW、LWW、LFF、LLL。

4.根据权利要求1～3任一项所述增强型合成Notch受体，其特征在于，所述的RAM结构域含有以下氨基酸片段之一：

5.根据权利要求4所述增强型合成Notch受体蛋白，所述RAM结构域序列如SEQ ID No.1～10氨基酸片段之一所示，或者，RAM结构域是N端为SEQ ID No.1～10之一序列、C末端带有任意氨基酸、长度为8～40的氨基酸片段。

6.根据权利要求1所述增强型合成Notch受体，其特征在于，所述的细胞外识别结构域为纳米抗体、单链抗体，或非抗体类别的识别支架；所识别的抗原相关结构域为：抗体特异性结合的肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、自身免疫疾病相关抗原、病原体相关抗原、疾病相关抗原或细胞外基质组分。

7.根据权利要求1所述增强型合成Notch受体，其特征在于，细胞内转录调节结构域包含以下结构域的至少一种：DNA结合结构域、转录调节结构域；所述的细胞内转录调节结构域为转录激活结构域或转录阻遏结构域。

8.一种核苷酸，其特征在于，含有用于编码权利要求1～7任一项所述增强型合成Notch受体的核苷酸序列。

9.一种重组表达载体，含有权利要求8所述的核苷酸序列。

10.一种宿主细胞，含有权利要求8所述的核苷酸序列或者权利要求9所述的重组表达载体。

11.权利要求1～7任一项所述的增强型合成Notch受体、权利要求8所述的核苷酸序列、权利要求9所述的重组载体或者权利要求10所述的宿主细胞用于筛选或制备治疗肿瘤、感染或自身免疫疾病的药物。

12.一种降低合成Notch受体配体非依赖性激活或者错误激活的方法，其特征在于，在合成Notch受体的Notch核心调节结构域与细胞内转录调节结构域之间插入RAM结构域；所述的RAM结构域长度为5～100个氨基酸，含有至少一个或多个由疏水性氨基酸任意组合的二氨基酸对；所述的疏水性氨基酸选自色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸或酪氨酸。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述RAM结构域含有三个连续的疏水性氨基酸。