[发明专利]解鸟氨酸拉乌尔菌G10及产酶方法与产品和应用

说明书

本发明公开了海洋来源的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)G10，其保藏号为CCTCC NO：M 2019485。该菌种为革兰氏阴性细菌，短杆状，有荚膜，不能运动；以牛肉膏蛋白胨培养时，菌落直径1～3mm，最适生长温度为30℃，最适生长pH为6。本发明还公开了该菌种产甲壳素脱乙酰基酶方法和产品。该菌种可以产生多种工农业用酶，包括甲壳素脱乙酰基酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶和纤维素酶。解鸟氨酸拉乌尔菌G10在生产甲壳素脱乙酰基酶过程中，培养基成分简单，培养时间短(24h)，培养温度低(25℃)。该酶酶活最适温度为30℃，最适pH为5。该酶具良好的pH适应性，在pH3～10之间均有27％以上酶活，在酶法制备壳聚糖中有应用。

技术领域

本发明涉及一种微生物，特别是一种分离自中国江苏省连云港海域的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)G10，已于2019年6月25日保藏在中国典型微生物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019485；本发明还涉及该菌种产甲壳素脱乙酰基酶的方法、产品及其应用。

背景技术

甲壳素脱乙酰基酶(Chitin deacetylase，EC 3.5.1.41)水解甲壳素多糖中的N-乙酰基。甲壳素中的N-乙酰基只要被脱去55％以上即可被称为壳聚糖。壳聚糖在医药、食品、化工、农业、环境工程和生物医学工程等诸多领域的有重要应用价值。目前市面上采用的甲壳素脱乙酰方法普遍为浓碱法，存在诸多弊端，例如污染环境、反应耗时长、产品质量不稳定等。生物酶法—甲壳素脱乙酰基酶可以解决上述问题，具有很多化学法不具备的优势，例如不会降解甲壳素分子中的主链部分、产物品质稳定、脱乙酰度较高、节约成本、耗时短等。虽然甲壳素脱乙酰基酶具有重要应用价值，但目前国内尚无商品化的酶制剂，所以其开发潜力巨大。已经报道的甲壳素脱乙酰基酶产生菌株多存在产酶发酵时间长，发酵温度高，产酶培养基成本高等缺点。综上所述，广泛筛选产酶量高、生产成本低的优良菌株是开发甲壳素脱乙酰基酶的重要途径。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种新的可产甲壳素脱乙酰基酶的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)G10。

本发明的另一个目的是提供解鸟氨酸拉乌尔菌G10产甲壳素脱乙酰基酶的方法。

本发明的又一个目的是提供解鸟氨酸拉乌尔菌G10所产甲壳素脱乙酰基酶产品。

本发明的再一个目的是提供了前述方法所产甲壳素脱乙酰基酶的用途；

本发明的又一个目的是提供了解鸟氨酸拉乌尔菌G10的水解应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。本发明是一种解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)G10，其特点是：其生物保藏号为：CCTCC NO:M 2019485。

本发明还公开了一种以上技术方案所述的解鸟氨酸拉乌尔菌G10生产甲壳素脱乙酰基酶的方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)种子培养：将解鸟氨酸拉乌尔菌G10斜面培养物接种到种子培养基中，转速150～180rpm，装液量20～30％，20～35℃培养10～15h，得到种子液；所述种子培养基组成为海带汁，制备方法为：干海带磨成80目粉，按20g/1000ml称取海带粉加入水中，煮沸20min，补充失水，过滤即得。

(2)液体摇瓶发酵：将种子液接种到产酶培养基中，150～200rpm，装液量30～50％，20～40℃培养15～32h，得到甲壳素脱乙酰基酶发酵液；所述产酶培养基的组成为：虾壳粉1～2％，硫酸铵0.1～0.5％，海带汁配制。