[发明专利]色氨酸2,3双加氧酶突变体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201910955751.1 | 申请日： | 2019-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN110628736B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 王喜庆;魏研欣;蒋胜胜 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 王玉 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 色氨酸 双加氧酶 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种色氨酸2,3双加氧酶突变体，其特征是，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码如权利要求1所述色氨酸2,3双加氧酶突变体的核苷酸序列，其特征是，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.包含如权利要求2所述色氨酸2,3双加氧酶突变体的核苷酸序列的载体。
4.表达权利要求1所述色氨酸2,3双加氧酶突变体的细胞，包含权利要求3所述的载体。
5.根据权利要求1所述的一种色氨酸2,3双加氧酶突变体的制备方法，其特征是，包括：
将色氨酸2,3双加氧酶第51位的氨基酸残基苯丙氨酸替换为甲硫氨酸，将第127位的氨基酸残基谷氨酰胺替换为酪氨酸，获得如权利要求1所述的色氨酸2,3双加氧酶突变体；
将构建的表达色氨酸2,3双加氧酶突变体的质粒转化到大肠杆菌中；
色氨酸2,3双加氧酶突变体的表达及纯化。
6.一种生产3a-羟基六氢吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的方法，其特征是，以色氨酸、5-氯色氨酸、6-氯色氨酸为底物，加入过氧化氢酶、亚甲基蓝、抗坏血酸和反应缓冲液，利用权利要求1所述的色氨酸2,3双加氧酶突变体为催化剂进行催化反应。
7.根据权利要求6所述的一种生产3a-羟基六氢吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的方法，其特征是，反应体系的pH为6.0，反应温度为25℃，反应时间为24 h。
8.权利要求1所述的色氨酸2,3双加氧酶突变体在制备含3a-羟基六氢吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的产品方面的应用。
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