[发明专利]细胞培养液及其应用

说明书

本发明提供一种细胞培养液，所述细胞培养液包含凋亡小体，本发明提供的细胞培养液可以促进干细胞特别是间充质干细胞的增殖效率和间充质干细胞的大规模培养，保持大规模培养后的间充质干细胞形态正常且细胞具有均一性；并能保持大规模培养后的间充质干细胞的多潜能性，使间充质干细胞的大规模临床应用成为可能。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域。尤其涉及一种适宜进行大规模细胞培养的细胞培养液及其应用。

背景技术

间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells， MSCs）是一类具有自我更新和多项分化潜能的多能干细胞，经诱导后可以分化为多种组织和细胞，由于其取材方便和不具有免疫排斥反应，是再生医学中一种较为理想的种子细胞。值得注意的是，大量传代培养或者高代次培养以后，有些细胞仍能保持其多潜能性，而有些细胞则开始衰老或其分化功能开始减弱，即生长速度逐渐变慢、细胞形态也由长梭形变的扁平粗大，进而失去临床上的使用价值，使用于细胞治疗的间充质干细胞不仅功能变差且数量明显减少。

专利CN201811341164.5公开了一种人脐带间充质干细胞大规模培养无血清培养基，所述培养基由以下浓度的组分组成的，各浓度单位若无特别说明，均为mg/L：L-精氨酸100～300；CuSO4·5H2O 0.0005～0.005；L-天门冬酰胺25～75；L-天门冬氨酸10～30；L-谷氨酸 10～30；Ni（NO3）2·6H2O 0.00002～0.0002；L-谷氨酰胺0～500；ZnSO4·7H2O 0.06～0.6；甘氨酸 5～15；CoCl2·6H2O 0.001～0.008；L-组氨酸10～30；NaSiO3·9H2O 0.001～0.01；L-异亮氨酸 25～75；Na3VO4·12H2O 0.0005～0.005；L-赖氨酸盐酸20～60；SnCl2·2H2O 0.00001～0.0001；L-蛋氨酸10～30；Na2SeO3 0.002～0.01；L-苯丙氨酸10～30；FeSO4·7H2O 0.2～1.6；L-脯氨酸10～30；葡萄糖 1000～4000；L-丝氨酸15～45；维生素C 0.176～0.704；L-苏氨酸10～30；对羟基苯甲酸0.5～1.5；L-色氨酸5～15；丙酮酸钠55～550；L-缬氨酸10～30；亚油酸 0.01～0.05；L-亮氨酸 25～75；β-巯基乙醇 0.8～4.0；二水L-酪氨酸二钠144～432；乙醇胺 1～5；L-胱氨酸二盐酸25～75；地塞米松 0.001～0.005；人转铁蛋白 5～50；人血清白蛋白 1000～5000；纤粘连蛋白 0.5～5；重组人成纤维细胞生长因子 0.1～10；重组人转化因子β 0.1～10；重组人表皮生长因子0.1～10；胰岛素：8～20；胆固醇：20～60；过氧化氢酶：20～50；亚硒酸钠：17.3～35.0；1％二巯基乙醇溶液：0.35～1.0ml/L；余量为水。上述无血清培养基存在的问题是在人脐带间充质干细胞大量传代培养以后，有些人脐带间充质干细胞仍能保持其多潜能性，而有些细胞则开始衰老，如生长速度逐渐变慢，细胞形态也由长梭形变的扁平粗大，进而失去临床上的使用价值。并且上述无血清培养基的成分复杂，不可控因素较多，如果大规模应用风险较大，成本较高。

发明内容

本发明的目的在于，针对现有技术存在的问题，提供一种细胞培养液及其在维持干细胞大规模培养中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

细胞培养液，所述细胞培养液包含凋亡小体。

优选地，所述凋亡小体为体外诱导干细胞凋亡产生的凋亡小体。

优选地，所述干细胞为第1-20代的间充质干细胞。

优选地，所述干细胞为脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓干细胞、牙周韧带干细胞、牙囊干细胞、牙胚祖细胞、来自根尖牙乳头的干细胞、口腔上皮祖细胞/干细胞、牙龈来源的间充质干细胞、骨膜来源的干细胞、凋亡唾液腺来源的干细胞或其任意组合。