[发明专利]H9N2亚型禽流感病毒扩增引物组及其可视化检测试剂盒与应用在审
| 申请号： | 201910956989.6 | 申请日： | 2019-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN110669868A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 袁小远;孟凯;张玉霞;杨金兴;亓丽红;艾武 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 37218 济南泉城专利商标事务所 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 扩增引物组 生物检测技术 可视化检测 检验检疫 快速检测 临床应用 特异性强 养殖基地 种特异性 灵敏度 试剂盒 灵敏 科研 应用 | ||
1.一种H9N2亚型禽流感病毒扩增引物组，其特征在于，所述的引物组包括：一对内引物FIP 和BIP、一对外引物F3 和B3及一对环引物LF和LB；
所述的外引物F3碱基序列如SEQ No.1所示；具体为：5′- TGTGCAACAAATCTGGGA- 3′；
所述的外引物B3碱基序列如SEQ No.2所示；具体为：5′- TGGTAGGAACTAGCAGAAC -3′；
所述的内引物FIP碱基序列如SEQ No.3所示；具体为：5′- GCTGATCACAAGAAGGGTTGCATCCTCTCATTCTAAACACCT -3′；
所述的内引物BIP碱基序列如SEQ No.4所示；具体为：5′- GTCCTACATCGTCGAAAGACCATGTGATCTTAGTTCCTCTAGGTT -3′；
所述的环引物LF碱基序列如SEQ No.5所示；具体为：5′- CATAGATCAGTCCTTCAATGGTAC-3′；
所述的环引物LB碱基序列如SEQ No.6所示；具体为：5′-CGGCCGTTAATGGAATGTGTTACC-3′。
2.一种含有权利要求1所述的H9N2亚型禽流感病毒扩增引物组的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括2×buffer、酶混合物EM、FIP、BIP、F3、B3、LB、LF、RNA和DEPC H2O；
所述的RNA为TA09株和BD11株。
4.权利要求2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取TA09株和BD11毒株RNA；
（2）RT-LAMP反应；
（3）灭活酶后进行LFD检测。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）的反应体系为2×buffer、酶混合物EM、FIP、BIP、F3、B3、LB、LF、RNA和DEPC H2O；反应引物浓度设置范围5pmol～50 pmol，反应时间设置30-60min，反应温度区间60℃～65℃。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）的反应体系为2×buffer 12.5μL，1.0μL酶混合物EM，FIP 和BIP各40 pmol，F3 和 B3各5 pmol，LB和LF各20pmol，RNA 5μL，余下为DEPC H2O；反应温度为63℃，反应时间为30min。
7.权利要求4所述的试剂盒在养殖基地、科研和检验检疫部门对禽H9N2 亚型AIV进行可视化检测。
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