[发明专利]寡糖的生产

权利要求书

1.一种使用宿主微生物用于生产寡糖的方法，其中所述寡糖并不天然存在于所述宿主细胞中，所述方法包括以下步骤：

a)在容许生产所述寡糖的条件和培养基中培养适用于生产期望的寡糖的宿主微生物，由此产生所述寡糖以及，在适用情况下产生生物合成的糖中间体和/或副产物；

b)使用培养所述宿主微生物的所述培养基中的糖苷酶，以降解生物合成糖中间体和/或糖副产物和/或未使用的糖底物，其中所述糖苷酶是由另外加入所述培养基并表达所述糖苷酶的第二微生物生产的；以及

c)回收所述期望的寡糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法是间歇或连续方法。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述寡糖回收自培养的所述宿主微生物的上清液，所述上清液通过离心培养的所述宿主微生物以获得上清液和宿主微生物沉淀而获得。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述期望的寡糖选自2'-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、2'3-二岩藻糖基乳糖、3'-唾液酸乳糖、6'-唾液酸乳糖、3-岩藻糖基-3'-唾液酸乳糖、乳-N-四糖、乳-N-新四糖、乳-N-岩藻糖五糖I、乳-N-岩藻糖五糖II、乳-N-岩藻糖五糖III、乳-N-岩藻糖五糖V、乳-N-二岩藻糖六糖I、乳-N-二岩藻糖六糖II、乳-N-唾液酸五糖LSTa、LSTb、LSTc以及尤其来自图11的表1中所示的寡糖或它们的衍生物的一种。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述糖苷酶选自由以下各项组成的组的一种或多种：半乳糖苷酶、甘露糖苷酶、岩藻糖苷酶、唾液酸酶(神经氨酸酶)、葡糖苷酶、N-乙酰基葡糖酰胺酶和N-乙酰基己糖酰胺酶。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述糖苷酶选自由以下各项组成的组的一种或多种：β-半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-N-乙酰基葡糖酰胺酶、β-N-乙酰基己糖酰胺酶、β-甘露糖苷酶α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、β-岩藻糖苷酶、β-葡糖苷酶、α-葡糖苷酶、神经氨酸酶。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述宿主微生物选自细菌和酵母菌，以及优选地是大肠杆菌菌株、乳杆菌种或谷氨酸棒杆菌菌株或酵母属菌种菌株。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，采用的所述宿主微生物表达用于糖分解代谢途径且不存在于所述微生物中的蛋白，所述蛋白选自以下各项的至少一种：当使用半乳糖苷酶时，半乳糖分解代谢途径蛋白；当使用岩藻糖苷酶时，岩藻糖分解代谢途径蛋白；当使用β-N-乙酰基己糖胺酶时，N-乙酰基葡糖胺分解代谢途径蛋白。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，在采用的所述宿主微生物中，用于在降解过程中释放的单糖的补救途径被过表达，以转化所述单糖。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，采用的所述宿主微生物是表达用于糖分解代谢途径的蛋白的野生型，所述蛋白选自以下各项中的至少一种：当使用半乳糖苷酶时，半乳糖分解代谢途径蛋白；当使用岩藻糖苷酶时，岩藻糖分解代谢途径蛋白；当使用β-N-乙酰基己糖胺酶时，N-乙酰基葡糖胺分解代谢途径蛋白，其中在所述方法期间，在所述宿主微生物中诱导这类蛋白的过表达。