[发明专利]一种地下水遗传毒性的检测方法及应用

权利要求书

1.一种地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.预培养：将鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium TA 1535/PSK 1002菌液加入含50mg/mL氨苄青霉素的LB培养基，在37℃、150rpm条件下恒温振荡隔夜培养10-12h，得到实验用菌液；

S2.前处理：采集地下水样品，通过固相萃取法处理，得到实验样品；

S3.暴露反应：在S2步骤所得实验样品中加入S1步骤所得实验用菌液，用TGA培养液稀释10倍后于37℃，150rpm条件下恒温振荡培养1.5-2h，使其595nm吸光度达到0.5-0.8，再在37℃，800rpm条件下恒温振荡培养3.5-4h，得稀释后混合液，测量其在595nm吸光度；

在稀释后混合液中依次加入B-buffer-SDS混合溶液和4.5mg/mL的O-NPG溶液，于30℃、800rpm条件下振荡反应30-35min；最后加入1mol/L的Na₂CO₃溶液终止反应，分别于420nm和550nm波长下测定吸光度；

S4.结果分析：采用诱导率判别是否具有遗传毒性，根据样品的梯度曲线进一步甄别假阳性结果，并用标准品的毒性当量浓度来表征样品的遗传毒性效应强度。

2.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S1步骤中菌液与含50mg/mL氨苄青霉素的LB培养基的体积比为1:400-420。

3.根据权利要求2所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S1步骤中菌液与含50mg/mL氨苄青霉素的LB培养基的体积比为1:420。

4.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S1步骤所得实验用菌液在595nm吸光度为1.6-1.8。

5.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于，所述S2步骤中固相萃取法，具体为：将采集的地下水样品过GF/F滤膜，HLB固相萃取柱分别用甲醇和Milli-Q水进行活化，然后再以3-5mL/min的流速过HLB柱；完毕后，以5vt％甲醇的水溶液润洗采样瓶，并过HLB柱，再分别向每根柱里加入Milli-Q水，抽干2h；先后以甲醇和二氯甲烷洗脱，合并洗脱液，于氮气下吹干，以甲醇定容，过0.22μm有机相滤膜并转移至深色小瓶中于-18℃保存。

6.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S3步骤中S2步骤所得实验样品和S1步骤所得实验用菌液的体积比为1:18-20。

7.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S3步骤中B-buffer-SDS混合溶液由B-Buffer溶液与0.1wt％SDS按20:1的体积比混合而得。

8.根据权利要求7所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S3步骤中B-buffer-SDS混合溶液、O-NPG溶液与稀释后混合液的体积比为11-14:2-4:4-6。

9.根据权利要求1所述的地下水遗传毒性的检测方法，其特征在于：所述S3步骤中Na₂CO₃溶液与稀释后混合液的体积比0.8-1.2:0.8-1.5。

10.权利要求1-9中任一项所述的方法在遗传毒性的检测与评估中的应用。