[发明专利]一种用于检测CoxA16病毒的引物组合、试剂盒和PSR方法

权利要求书

1.一种用于检测CoxA16病毒的引物组合，其特征在于，具体引物序列如下：

CA16-Ft2：5’-TTTGTTGAGCGTAAAGGCGGCATTTCTTTAGCCGTG CTGG-3’；SEQ ID NO.4；

CA16-Bt2：5’-CGGCGGAAATGCGAGTTGTTTGGTTTGGCTACGAC AAATGTG-3’；SEQ ID NO.5；

CA16-IF：5’-CATTGTAATGATGCTGACCA-3’；SEQ ID NO.6；

CA16-IB：5’-GCGCTTTGATGCTGAATT-3’；SEQ ID NO.7。

2.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括双指示系统和阳性对照。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述双指示系统包括显色液和/或荧光染料；所述显色液包括0.08mM甲酚红和0.02mM苯酚红；所述荧光染料为SYBR GreenI或EveGreen。

5.一种用于检测CoxA16病毒的PSR方法，其特征在于，包括如下步骤：用权利要求1所述的引物组合对待测样品进行PSR反应，检测PSR反应产物，确定待测样品是否含有CoxA16病毒。

6.根据权利要求5所述的一种用于检测CoxA16病毒的PSR方法，其特征在于，所述PSR反应体系如下：12.5μl的2×RM，2.0μl DNA模板和1.0μl BstDNA聚合酶、1.0μl AMV逆转录酶，引物的CA16-Ft2、CA16-Bt2各1.6μM，CA16-IF、CA16-IB各0.8μM，并用水补齐25μl。

7.根据权利要求5所述的一种用于检测CoxA16病毒的PSR方法，其特征在于，所述PSR反应条件为61-67℃，40-60min。

8.根据权利要求5所述的一种用于检测CoxA16病毒的PSR方法，其特征在于，所述检测PSR反应产物确定待测样品是否含有CoxA16病毒的方法为：若能扩增，则待测样品含有CoxA16病毒；若不能扩增，则待测样品不含有CoxA16病毒。

9.根据权利要求5所述的一种用于检测CoxA16病毒的PSR方法，其特征在于，所述检测PSR反应产物确定待测样品是否含有CoxA16病毒的方法为a、b或c：

a、浊度法：浊度仪检测所述待测样品PSR反应产物浊度变化曲线，若所述待测样品PSR反应产物浊度变化曲线呈上升状态，则所述待测样品为CoxA16病毒，若所述待测样品PSR反应产物浊度变化曲线不呈上升状态，则所述待测样品不为CoxA16病毒；

b、显色法：所述PSR反应中加有显色液，观察所述待测样品PSR反应产物的颜色，若所述待测样品PSR反应产物为黄色，则所述待测样品为CoxA16病毒，若所述待测样品PSR反应产物为红色，则所述待测样品不为CoxA16病毒；

c.荧光法：所述PSR反应中加有荧光染料，在荧光定量仪中进行扩增反应：若在反应阶段出现S型扩增曲线，且溶解曲线为单一峰阳性反应的，为阳性；在反应阶段无扩增曲线，且溶解曲线无峰出现，为阴性；结果判定标准：在阳性对照发生阳性反应且阴性对照发生阴性反应的前提下，待测样品在反应阶段出现S型扩增曲线，且溶解曲线为单一峰，并与阳性对照单一峰位置接近，此时待测样品判断为阳性，否则为阴性。