[发明专利]一种快速检测白色念珠菌的试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测白色念珠菌的特异性引物对，其特征在于，特异性引物对的核苷酸序列如下：

Ft：5’-gtcaaagcgatcccgccttacTGAGCGTCGTTTCTCCCT-3’；SEQ ID NO.1；

Bt：5’-cattccgccctagcgaaactgGATATACGTGGTAGACGTTGC-3’；SEQ ID NO.2；

IF：5’-CTCAACACCAAACCCAGCGG-3’；SEQ ID NO.3；

IB：5’-ACATTGCTTGCGGCG-3’；SEQ ID NO.4。

2.一种快速检测白色念珠菌的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1的特异性引物对。

3.根据权利要求2的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒，其特征在于，包括试剂一、试剂二和封闭剂；

其中，试剂一包含引物Ft、Bt，引物IF、IB，Bst DNA聚合酶、dNTP和指示剂；试剂二包含Tris-HCl、硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、Tween-20和甜菜碱，pH 8.8；

封闭剂为石蜡。

4.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒，其特征在于，最终工作体系中，各试剂浓度为：

Ft、Bt各1.6μM，IF、IB各0.8μM，dNTP各1.4mM，Bst DNA聚合酶8U，Tris-HCl 20.0mM，硫酸铵10mM，氯化钾50mM，硫酸镁8mM，Tween-200.1％，甜菜碱0.8M，pH 8.8。

5.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒，其特征在于，指示剂包括pH指示剂；pH指示剂为甲酚红-苯酚红指示剂，最终工作体系中，甲酚红浓度0.08mM，苯酚红浓度0.02mM。

6.利用权利要求2-5任一所述的试剂盒快速检测白色念珠菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用Chelex裂解液，加热提取待检测样品的核酸；

(2)以步骤(1)核酸为模板加入试剂盒的试剂一中，后与试剂二进行混合，加入封闭液防止污染；

(3)在65-67℃的条件下，恒温扩增30-60min，显色法观察判断结果和/或利用实时浊度法进行检测。

7.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法，其特征在于，试剂盒的工作体系为25μL，包括：试剂一1μL，pH为8.8的试剂二12.5μL和DNA模板11.5μl。

8.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法，其特征在于，步骤(1)中将200μL样本或样本稀释液加入2mL Chelex裂解液，充分混匀，裂解条件为90℃-95℃加热10min，冷却后的上清液即可作为待扩增的核酸模板；

所述Chelex裂解液的配制：取5.0g Chelex-100和1.0ml TritonX-100溶于100ml TE缓冲液中制成；所述TE缓冲液包括：Tris 10mM，EDTA 1mM。