[发明专利]一种利用金针菇生物合成纳米硒的方法

权利要求书

1.一种生产纳米硒的方法，其特征在于，在含四价无机硒盐的环境中利用金针菇(Flammulina velutipes)发酵和/或子实体浸没培养，生产纳米硒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，收集发酵产物中的纳米硒；所述发酵产物包括但不限于金针菇菌丝体、子实体(含菌柄)、发酵液、发酵液离心后的沉淀物、金针菇菌体裂解液。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在接种后发酵至6～9d时分别加入四价无机硒盐使发酵液中硒的最终浓度为0.1～20mM，继续发酵至总时间9～12d。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述四价无机硒盐溶液为Na₂SeO₃溶液。

5.根据权利要求1～4任一所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)采用PDA培养基对金针菇菌种进行活化；

(2)将步骤(1)活化获得的金针菇菌丝转接至种子培养基中，于20～28℃培养5～8d；

(3)将步骤(2)培养的种子液按10⁵个孢子/mL发酵液转接至发酵培养基中，22～30℃，130～200rpm发酵6～9d。

(4)向步骤(3)的发酵液中加入四价无机硒盐Se(IV)溶液，继续发酵，使总发酵时间达9-12d，按照a、b、c任一方法收集发酵获得的纳米硒或含纳米硒的产品：

a：直接收集发酵产物；

b：将步骤(3)发酵后的金针菇发酵液无菌过滤，收集菌丝，用无菌水洗涤菌丝3～5次，转移至含四价无机硒盐的溶液中继续摇床培养2～4d，获得富硒金针菇菌丝体；

c：将步骤(4)获得的金针菇菌丝体于22～30℃静置培养15～25d，获得金针菇子实体，将其浸没于四价无机硒盐溶液静置培养1～4d，得到富硒金针菇子实体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还对发酵和/或培养结束后的发酵产物中的纳米硒进行分离。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将发酵/培养产物过30～50目筛，收集菌体，清洗3-5遍，破碎细胞，得到菌体裂解液；将菌体裂解液于5000-8000rpm离心10-30min，分散清洗，重复2～3遍；将沉淀物重悬，经截留分子量3000～4000Da透析袋透析后，冷冻干燥，得纳米硒干粉。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将发酵和/或培养结束后的发酵产物过30目筛，收集菌体，清洗3～5遍，将菌体冷冻干燥，磨粉，过筛，获得含纳米硒的菌体粉末。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将发酵和/或培养结束后的发酵产物过30目筛，去除菌体后，将发酵液由定量滤纸过滤除去固形物，经超滤膜超滤后收集回流液，冷冻干燥，即得纳米硒干粉。

10.应用权利要求1～9任一所述方法制备的产品。