[发明专利]一株维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL及其应用

说明书

一株维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明制备的维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2019年3月7日，保藏编号CGMCC No.17397。本发明提供的细胞株YSL分泌的单克隆抗体，对VIR具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为40ng/mL），可实现对鸡肉和鸡的肝脏、饲料中VIR残留量的检测，为食品中VIR残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

维吉尼亚霉素（Virginiamycin，VIR）又名纯霉素，仅对革兰氏阳性菌有抑制作用。作用机理是抑制细菌的核糖体(ribosome)而阻止它对蛋白质的合成达到杀菌效果。口服后仅停留并作用于肠道，主要由粪便排出，残留量很小。对大鼠口服LD50每千克体重为7500mg，一次性口服，对小鼠的剂量每千克体重达到1550mg时，未发现有害反应，对猪最大安全量为每千克体重800mg。以500mg的剂量连续喂猪3个月，无不良反应。

维吉尼亚霉素已被广泛应用于猪、牛养殖和饲料等领域。因此 维吉尼亚霉素在牛肉、猪肉和饲料中一般都有一定的残留，而人体摄入维吉尼亚霉素过多对人类的肝肾等器官会造成代谢负担，若在动物蛋白（牛肉、猪肉、牛奶）中，有维吉尼亚霉素残留，则有害于人类健康。维吉尼亚霉素稳定性好，室温保存3年效价不变。当添加到饲料中时，经过粉碎、混合、高温(70~90℃)、蒸汽、制粒约30min等加工过程，都可保持稳定效价。在肉鸡料中可保存6个月以上。其预混剂的载体可以用碳酸钙、碎米糠(含2%除尘用的油)、大豆粉、玉米粉等。饲料中含鱼粉多时，一般抗生素破坏较快(6个月中金霉素下降20%~40%)，而维吉尼亚霉素在含鱼粉的高蛋白饲料中保存6个月效价基本不变。中华人民共和国农业部规定：在16周龄以下鸡饲料添加量为2~5mg/kg，对猪饲料为10-20mg/kg。猪、鸡停药期均为1d。产蛋鸡禁用。但是这些标准都采用高效液相色谱方法检测，检测方法较为繁琐、复杂，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对VIR的高效、快速的检测方法，而酶联免疫法（ELISA）前处理简单，成本低，可实现大量样品的快速检测，且检测时对样本的纯度要求不高。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对维吉尼亚霉素的高特异性单克隆单体。

发明内容

本发明的目的是提供一株维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL，由该细胞株制备的抗体对维吉尼亚霉素具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立维吉尼亚霉素的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年3月7日，保藏编号CGMCC No.17397。

维吉尼亚霉素单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.17397的维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL分泌产生。

所述维吉尼亚霉素单克隆抗体的应用，具体用于食品安全检测中维吉尼亚霉素残留的分析检测。

本发明提供的维吉尼亚霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株YSL的制备基本步骤为：

（1）半抗原的衍生：采用的原药分子式如下：

原药 Mol. Wt: 525.59；

半抗原：用维吉尼亚霉素原药衍生出羧基基团，分子式如下：

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