[发明专利]利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法

说明书

本发明公开了利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，包括以下步骤：1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。本发明的有益效果为：本发明提供的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，首次利用SSR分子标记技术开展当归种间(当归与近缘属药材)鉴别，构建了正品当归的SSR指纹图谱，使之能够从分子层面进行伪品剔除，解决了市场上当归药材来源混杂的问题，为当归品牌标识、育种提供可靠的材料，并对其进行遗传多样性评价。为当归产业的健康可持续发展提供技术支撑，同时可以对当归种质进行遗传多样性分析，挖掘优质基因。

技术领域

本发明涉及中药材鉴定技术领域，具体涉及利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法。

背景技术

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，又叫秦归、云归、西当归和岷当归，生长于海拔1800～2500m高寒阴湿地区。主要栽培于甘肃岷县及云南。性甘、辛、温。有补血活血、调经止痛、润肠通便等功能。临床上用途广泛，有“十方九归”之说。现代药理研究表明当归具有多种药理功效。当归为伞形科当归属的栽培植物，是著名常用药材之一。《中国药典》2015版收载的当归来源仅为当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，其余品种与当归在功效上均有较大差异，严重影响用药安全。

药用植物覆盖了广泛的植物类群，其中包含形态学上难以鉴别的物种。调查显示，中国药用植物覆盖了383科、2309属、11146种，具有丰富的生物多样性。由于有些植物在形态上极其相似，加之长期以来对中草药的品种来源、定名、谱系、品种特性等缺乏科学管理，致使中药材名称混乱，出现一名多物、一物多名等现象，给用药安全带来了隐患。中药材传统的鉴定方法主要是性状鉴别、显微鉴别和化学特征鉴别，受原植物生长环境、生长期及炮制加工工艺的影响较大。近年来，分子鉴别方法已经广泛的在中药材上发展起来。当归药用历史悠久，品种来源甚多，由于产地、来源和加工方法不同，药材质量有很大差别，商品名称也十分混乱。目前，当归的分子鉴别在ITS、trnl-F、ISSR和RAPD上均有研究，但在SSR上还未见报道。SSR作为分子标记的一种，在植物学与农学领域广泛应用于系谱分析与进化、遗传图谱构建、基因定位克隆、品种鉴定等方面，具有高度重复性、丰富的多态性、共显性、高度可靠性等优点。本发明利用SSR指纹图谱鉴别当归与近缘属药材，为当归的种质资源保护和利用、市场的健康可持续发展提供技术支撑。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，即针对目前市场上当归品种混乱、真假掺卖、优质当归供不应求的情况，提供了利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，首次利用SSR分子标记技术开展当归种间(当归与近缘属药材)鉴别，构建了正品当归的SSR指纹图谱，使之能够从分子层面进行伪品剔除，并对其进行遗传多样性评价。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，包括以下步骤：

1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；

2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；

3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。

鉴定标准为扩增样本的图谱与本发明中的附图1所示的模拟图谱(其中扩增条带数量及位置)相符，则证明是正品当归。

进一步的，上述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，所述步骤1)中，待测当归与近缘属药材样本总DNA提取，是采用天根植物基因组试剂盒进行提取。

进一步的，上述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，所述步骤2)中，2对SSR引物序列分别为：

引物A：上游引物：5'-ACCAAACCACCTATGTCACTAC-3'；