[发明专利]无细胞反应系统生产病毒的方法

权利要求书

1.一种无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，将宿主细胞用胰酶消化后，用PBS缓冲液进行冲洗，再用PBS缓冲液悬浮；

S2，将宿主细胞的细胞膜打破，保持细胞胞浆内的物质不变；

S3，然后向宿主细胞内加入病毒基因组DNA/RNA，再加入ATP、GTP、氨基酸进行孵育后，得到成熟的病毒粒子。

2.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S1中，所述PBS缓冲液的pH为6.5-7.8。

3.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S1中，用PBS缓冲液悬浮时，宿主细胞与PBS缓冲液之比为1:1-5。

4.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S2中，利用超声法或反复冻融法将宿主细胞的细胞膜打破。

5.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S2中，采用皂基或表面活性剂打破宿主细胞的细胞膜。

6.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S2中，采用低渗的方法打破宿主细胞的细胞膜。

7.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S3中，所述病毒基因组DNA/RNA的浓度为1-100mmol/L；所述ATP和GTP的浓度均为0.01-5mol/L；所述氨基酸的浓度为0.01-3mol/L。

8.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S3中，孵育温度为33℃-40℃，孵育时间为12-24小时。

9.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，步骤S3中，所述病毒基因组DNA以核酸片段或质粒形式加入到宿主细胞中；

所述病毒基因组DNA通过聚合酶链式反应获得，或者通过原核细胞的质粒扩增，然后进行酶切获得，或者通过人工合成直接获得。

10.根据权利要求1所述的无细胞反应系统生产病毒的方法，其特征在于，所述宿主细胞包括细菌、植物细胞、动物细胞或人的细胞，相对应的用于生产噬菌体、植物病毒、动物病毒、人的病毒。