[发明专利]一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用

权利要求书

1.一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用,

其特征在于采用如下方法制备 ：

（1）将甲基营养型芽孢杆菌LW-6原种接种于琼脂淀粉平板培养基上，35℃下培养 72h，显微镜下检测，选择中央芽孢形成均一，两端着色清晰的大菌落作为发酵出发菌落；

（2）将所述步骤(1)所述的发酵出发菌落接种于液体种子培养基，装液量为 ：500ml的摇瓶装 100ml 种子液，培养温度 35℃，转速 200rpm 条件下培养 72h，得到发酵种子液 ；

（3）将步骤 (2) 得到的发酵种子液，按照 9％的接种量接入发酵培养基，在发酵罐中进行发酵培养，培养条件为 ：罐压 0.07Mpa，风量 1:0.8vvm，转速260rpm，培养温度为 35℃， 直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达200亿/ml 以上、芽孢量大于或等于 92％时即可终止发酵，

(4) 将步骤(3)得到的发酵液进行超滤浓缩,去掉40%水分，其特征为：：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和1nm的3个超滤膜组件，将发酵液在35℃、压力0.3MPa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间4h, 得到一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6液体菌剂,活孢子数≥200亿/ml。

2. 如权利要求 1所述的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌液，其特征在于，所述步骤（1）中的甲基营养型芽孢杆菌保藏登记号为：CGMCCNo.6793，保藏机构为 ：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的甲基营养型芽孢杆菌。

3. 如权利要求 1 所述的甲基营养型芽孢杆菌液，其特征在于，所述步骤（1）中的琼脂淀粉平板培养基组分如下，均为重量百分比 ：琼脂15%，淀粉7%，酵母浸粉 1.8%，蛋白胨01.3%，硫酸镁0.1%,碳酸钠0.2%，氯化钠 0.8%，余量为水，pH7.2～ 7.3。

4. 如权利要求 1 所述的甲基营养型芽孢杆菌菌液，其特征在于，所述步骤（2）中液体种子培养基组分如下，均为重量百分比 ：蛋白胨1.0%，葡萄糖 2.6％，酵母浸膏 1.3％，NaCl 0.8％，硫酸镁0.1%,碳酸钠0.2%，余量为水，PH7.0～7.1。

5.如权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌液，其特征在于，所述步骤（3）中发酵培养基的组成成分及重量百分比为：玉米浆 0.7％，玉米淀粉 0.2％，麸皮粉1.4％，葡萄糖0.8％，酵母浸膏 0.5％，蛋白胨 0.2％，KH2PO4 0.005 ％，(NH4)2SO4 0.009 ％，MnSO40.006 ％，CaCO3 0.007 ％， MgSO4.7H2 0.008％，硫酸镁0.1%,碳酸钠0.2%，余量为水，pH7.4～ 7.5。

6.权利要求 1 所述的是一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌液的制备及应用。

7.如权利要求 6 所述的应用，其特征在于，步骤如下 ：

将一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6液体菌剂在播种前做好浸种处理（3h），待棉花出苗2个月，与水1：800混合4小时后（充分混合并通过200目滤网过滤后），进行滴灌，每隔7天重复一次，共计处理3次。