[发明专利]人源化IL-4和/或IL-4Rα改造动物模型的制备方法及应用

权利要求书

1.一种包含IL-4Rα基因的人源化非人动物的构建方法，其特征在于，所述的人源化非人动物的基因组中包括人IL-4Rα基因的外显子4的部分序列、外显子5的全部序列、外显子6的全部序列和外显子7的部分序列，所述的构建方法包括使用靶向载体将内源IL-4Rα基因的外显子4的部分序列至外显子7的部分序列替换为人IL-4Rα基因的外显子4的部分序列至外显子7的部分序列，所述的人源化非人动物体内可表达人源化IL-4Rα蛋白，同时内源IL-4Rα蛋白表达降低或缺失，所述的人IL-4Rα基因的外显子4的部分序列至外显子7的部分序列如SEQ ID NO：47所示，所述的人源化非人动物的基因组中包括内源IL-4Rα基因的外显子1的全部序列、外显子2的全部序列、外显子3的全部序列、外显子4的部分序列和外显子7的部分序列及其后所有外显子的全部序列，所述的非人动物为小鼠，所述的靶向载体包含：a）与待改变的转换区5’端同源的DNA片段，即5’臂，其选自NCBI登录号为NC_000073.6的第125562909-125567172位核苷酸序列；b）插入或替换的供体DNA序列，其编码供体转换区，所述的供体DNA序列如SEQ ID NO：47所示；c）与待改变的转换区3’端同源的第二个DNA片段，即3’臂，其选自NCBI登录号为NC_000073.6的第125572100-125576624位核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人IL-4Rα基因通过内源性调控元件调控；所述的人或人源化IL-4Rα蛋白结合靶向人特定抗原的抗体。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化IL-4Rα蛋白包括胞外区、跨膜区及胞内参与信号传导的区域，其中，所述的胞外区包括人IL-4Rα蛋白胞外区的部分，所述的跨膜区及胞内参与信号传导的区域来源于非人动物IL-4Rα蛋白。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化IL-4Rα蛋白包含的人IL-4Rα胞外区序列为SEQ ID NO：42第30-216位所示氨基酸序列。

5.根据权利要求1-4任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化非人动物的基因组中包括人IL-4基因，该人源化非人动物表达人或人源化IL-4蛋白，同时内源IL-4蛋白表达降低或缺失。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化非人动物的基因组中包括人IL-4基因的从外显子1的起始密码子至外显子4的终止密码子的连续序列。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化非人动物的基因组中包括人IL-4基因长度为8.5kb。

8.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的人IL-4基因长度为10.0kb。

9.根据权利要求1-4和6-8任一所述的构建方法，其特征在于，使用基因编辑技术进行人源化非人动物的构建，所述基因编辑技术选自利用胚胎干细胞的基因打靶技术、CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子核酸酶技术或归巢核酸内切酶技术。

10.根据权利要求1-4和6-8任一所述的构建方法，其特征在于，使用sgRNA靶向技术实现将内源IL-4Rα基因的外显子4的部分序列至外显子7的部分序列替换为人IL-4Rα基因的外显子4的部分序列至外显子7的部分序列；sgRNA靶向的5’端靶位点序列如SEQ ID NO：65-71任一项所示，3’端靶位点序列如SEQ ID NO：72-79任一项所示。

11.根据权利要求1-4和6-8任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化IL-4Rα蛋白为嵌合IL-4Rα蛋白，所述的嵌合IL-4Rα蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：44所示。