[发明专利]一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板及其应用

说明书

本发明公开了一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板及其应用，本专利将筛选获得的噬菌体根据其对不同人畜共患病原菌的裂解效果，形成不同人畜共患病原菌的噬菌体库，并根据噬菌体库设计制备一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板，该检测板包括A噬菌体盒、B接种盒和C检测盒，利用本专利可构建高通量噬菌体筛选体系，形成一套完整的标准化操作、高通量检测、自动化识别并转化为统计数据智能化组合、信息可上传兽医抗药性云监测与噬菌体防控(Varms)数据库的筛选体系。

技术领域

本发明涉及一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板及其应用，属于微生物领域。

背景技术

细菌感染和污染是我国乃至全球的经济和健康问题。抗生素近半个世纪的广泛应用，导致人畜共患病原菌，如沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌等普遍存在多重抗药性，噬菌体防治细菌感染和防止细菌污染具有巨大的应用潜力，成为当代医疗和畜产品生产的迫切需要。

噬菌体是细菌的特异性病毒，具有种甚至菌株的高度特异性，而兽医临床流行菌株又是变异和流动的，群体小动物饲养流行菌株往往形成异质的流行菌群，因此①需要高效动态获得大范围流行菌株；②筛选相应的噬菌体，逐步建立某种细菌的菌株库和噬菌体库(均为几百株的规模)，这样，③面对某一菌株或者菌群，从噬菌体库中高效筛选相应的裂解性噬菌体，才能获得最佳的防治效果。

传统的点滴法筛选噬菌体的检测产品，存在通量小、成本高、耗时、费力、裸眼不能准确识别和统计等缺点。因此，需要建立一种标准化操作、高通量检测、自动化识别并转化为统计数据智能化组合的筛选体系，按照裂解率排序优选，根据各株噬菌体的裂解谱的互补性进行组合优化，以最少种类的噬菌体裂解最多种类的细菌

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板及其应用，本专利将筛选获得的噬菌体根据其对不同人畜共患病原菌的裂解效果，形成不同人畜共患病原菌的噬菌体库，并根据噬菌体库设计制备一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板。

一种高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板，包括A噬菌体盒、B接种盒和C检测盒；

所述A噬菌体盒包括噬菌体液或噬菌体冻干粉(使用时加生理盐水稀释悬浮)、第一孔板和第一不带接种针的盖板；

所述B接种盒包括第二孔板和带接种针的盖板，所述的带接种针的盖板上的接种针和带孔噬菌体板上的孔洞一一对应；

所述C检测盒包括菌种检测板和第二不带接种针的盖板。

进一步的，上述第一孔板和第二孔板为96孔板。

进一步的，上述噬菌体液放置于第一孔板的孔洞中，每个孔洞放置一种噬菌体液。

进一步的，上述菌种检测板不带孔洞。

进一步的，上述人畜共患病原菌优选为但不限于大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌中的一种。

进一步的，上述高通量筛选人畜共患病原菌噬菌体检测板的制备方法包括如下步骤：

1)人畜共患病原菌菌液的制备：划线平板法培养一种人畜共患病原菌，挑取单菌落接种于液体培养基中，36-38℃，150-180r/min震荡培养6-10h，检测菌种生长情况，菌种到达指数生长期即可；

2)获得上述人畜共患病原菌的噬菌体：取步骤1)中获得的人畜共患病原菌的菌种液，人畜共患病原菌的噬菌体，利用双层琼脂法制备含有人畜共患病原菌的菌种液及其噬菌体的平板培养基，35-37℃培养3-6h，挑取平板上透明清晰单个噬菌斑至SM缓冲液中，3-4℃过夜，滤膜过滤，获得噬菌体；