[发明专利]一种从生物体代谢物中筛选靶蛋白配体的方法

权利要求书

1.一种从生物体代谢物中筛选靶蛋白配体的方法，其特征在于：基于动态体积排阻色谱-质谱联用技术；

（1）采用连续区段进样模式将代谢物提取物及空白的流动相上样到体积排阻色谱柱中进行分离，并利用质谱进行在线分析；

（2）采用连续区段进样模式将代谢物提取物及目标靶蛋白先后依次上样到体积排阻色谱柱中进行分离，并利用质谱进行在线分析；固定代谢物提取物上样量使其与步骤（1）相同；

（3）重复步骤（2）的过程，固定代谢物提取物上样量使其与步骤（1）相同，提高目标蛋白的上样量使其大于上一步骤的上样量；

（4）重复步骤（3）1次以上；

（5）利用非靶向代谢组学分析方法分别将步骤（1）与步骤（2）-（4）的质谱数据进行比较，找出色谱峰发生位移及强度发生变化的物质，筛选出代谢物提取物中保留形式及相对丰度变化与目标蛋白浓度变化成正比的代谢物作为目标蛋白的潜在内源性配体；

上述步骤（2）-步骤（4）所采用的连续区段进样模式由连续两针进样序列完成：第一针分析首先进样血清代谢物提取物，进行短时间体积排阻分离，随后进行第二针分析进样目标蛋白质，二针间隔时间15秒至60秒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）-步骤（4），首先固定代谢物提取物进样量，然后进样5 μL含有目标蛋白浓度为0μM目标蛋白甲酸铵溶液的空白对照、以及含有目标蛋白浓度为5 μM、25 μM、125 μM、250 μM及500 μM的甲酸铵溶液，并进行35 min的体积排阻色谱-质谱分析，柱温为25℃。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于： 甲酸铵溶液浓度10-30mM。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：SEC-MS在线分析采用高分辨质谱全扫描+自动触发二级质谱扫描的模式进行数据采集，利用一级质谱和二级质谱对目标蛋白潜在内源性配体进行定性。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：生物体代谢物来源于经过甲醇沉淀蛋白并取其上清的血清或尿液，或者生物体代谢物是前体药物中的一种或二种以上；

靶蛋白为人血清白蛋白、碳酸酐酶、鸡卵清蛋白中的一种或二种以上。