[发明专利]一种快速检测诺如病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括用于检测GI组诺如病毒的第一引物和与第一引物对配的第一TaqMan探针、用于检测GII组诺如病毒的第二引物和与第二引物对配的第二TaqMan探针、DEPC水、诺如病毒质控样溶液、RNA抑制剂、反应缓冲液和诺如病毒阳性对照。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述用于检测GI组诺如病毒的第一引物为G1SKR(+)，其序列5’为CTGCCCGAATTYGTAAATGA，与第一引物对配的第一TaqMan探针为Ring1B，Ring1B的5’端采用FAM荧光素标记。

3.根据权利要求2所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述用于检测GII组诺如病毒的第二引物为COG2F(+)，其序列3’为CARGARBCNATGTTYAGRTGGATGAG，所述与第一引物对配的第二TaqMan探针为Cog2R，Cog2R的3’端采用BHQ淬灭基团标记。

4.根据权利要求3所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述第一引物与第一TaqMan探针的比例为4.5:1，且第一引物的工作浓度为320nM，所述第二引物与第二TaqMan探针的比例为4.2:1，且第二引物的工作浓度为340nM。

5.根据权利要求4所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述第一引物与第一TaqMan探针的比例为4.2:1，且第一引物的工作浓度为300nM，所述第二引物与第二TaqMan探针的比例为4:1，且第二引物的工作浓度为330nM。

6.根据权利要求5所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述第一引物与第一TaqMan探针的比例为4:1，且第一引物的工作浓度为340nM，所述第二引物与第二TaqMan探针的比例为4.4:1，且第二引物的工作浓度为310nM。

7.根据权利要求1所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为GIV病毒动物肠胃黏膜溶液，且阳性对照中包含诺如病毒的特异性受体和cDNA。

8.根据权利要求1所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述反应缓冲液为盐酸、氯化钾、硫酸铵、硫酸镁和硫酸钠中的一种或者多种组合，且反应缓冲液的预定反应体积为15×Bst。

9.根据权利要求7所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照、诺如病毒质控样溶液和RNA抑制剂需在冷冻的环境下进行冰浴。

10.根据权利要求1-9任一项所述的一种快速检测诺如病毒的试剂盒，其特征在于：其检测方法包括以下步骤：

步骤一、试剂准备，将试剂从试剂盒中取出，并将试剂离心处理4～7S进行备用；

步骤二、对照设立，将GII病毒动物肠胃黏膜溶液设立两组，分别与GI组和GII组对应；

步骤三、提取诺如病毒RNA，并且在提取RNA的同时，通过对比诺如病毒质控样溶液进行判断提取过程中是否正常；

步骤四、配置反应体系，将第一引物和第二引物分别添加到两组反应缓冲液中混合均匀，随后将提取出的RNA、与第一引物或第二引物对应的第一TaqMan探针或第二TaqMan探针、DEPC水和RNA抑制剂依次添加到两组反应缓冲液中；

步骤五、使用PCR仪对混合溶液进行多阶段反应。第一阶段：45℃32min；第二阶段：100℃12min；第三阶段：95℃35s，并且为42个循环。