[发明专利]一种肝素结合蛋白生产提纯方法在审

专利信息
申请号: 201910969105.0 申请日: 2019-10-12
公开(公告)号: CN110903375A 公开(公告)日: 2020-03-24
发明(设计)人: 顾佳;葛行义;徐达;叶生宝 申请(专利权)人: 南京立顶生物科技有限公司
主分类号: C07K14/47 分类号: C07K14/47;C07K1/14;C07K1/22
代理公司: 南京禾易知识产权代理有限公司 32320 代理人: 李海霞
地址: 210000 江苏省南京市*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 肝素 结合 蛋白 生产 提纯 方法
【说明书】:

发明公开了一种肝素结合蛋白生产提纯方法,涉及医学生产相关领域,为解决现有技术中的对肝素结合蛋白的提取纯度不够,还需要进行重组生产来提高肝素结合蛋白含量,对于较大规模生产不利的问题。包括如下步骤:S1:从感染区域内的血管中抽取定量的血液样本;S2:将血液样本静置1h;S3:将静置后的血液样本于室温下静置4‑5h后,通过离心机进行血浆与血清的分离;S4:将胰蛋白酶抑制剂与琼脂糖凝胶偶联,得到中间物质;S5:将S4得到的中间物质加入S3制得的血浆中,通过层析法将肝素结合蛋白从血浆中吸附出来,此时得到含有肝素结合蛋白的吸附液;S6:通过解吸剂将肝素结合蛋白从吸附液中吸附出来。

技术领域

本发明涉及医学生产相关领域,具体为一种肝素结合蛋白生产提纯方法。

背景技术

肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP),是中性粒细胞来源的颗粒蛋白,其结构包含222个氨基酸的单链蛋白,含有8个半胱氨酸残基,在第100、114或145位天冬氨酸残基上具有糖基化位点,结构类似于中性粒细胞弹性蛋白,与其同源性为45%。肝素结合蛋白是一种多功能的蛋白,可以通过结血管上皮细胞,改变透性,诱导血浆渗漏和炎症反素结合蛋白还能够趋化和激活单核白细胞和巨噬细胞,应对细菌感染,参与调节免疫反应。

肝素结合蛋白能够应对细菌感染,参与调节免疫反应,所以对于肝素结合蛋白的生产研究越来越重视,因肝素结合蛋白在一般感染时达到20-30ng/ml,严重感染时还可能超过100ng/ml,但现有对肝素结合蛋白的提取纯度不够,还需要进行重组生产来提高肝素结合蛋白含量,对于较大规模生产不利;因此市场急需研制一种肝素结合蛋白生产提纯方法来帮助人们解决现有的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝素结合蛋白生产提纯方法,以解决上述背景技术中提出的对肝素结合蛋白的提取纯度不够,还需要进行重组生产来提高肝素结合蛋白含量,对于较大规模生产不利的问题。

为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种肝素结合蛋白生产提纯方法,包括如下步骤:

S1:从感染区域内的血管中抽取定量的血液样本;

S2:将血液样本静置1h;

S3:将静置后的血液样本于室温下静置4-5h后,通过离心机进行血浆与血清的分离;

S4:将胰蛋白酶抑制剂与琼脂糖凝胶偶联,得到中间物质;

S5:将S4得到的中间物质加入S3制得的血浆中,通过层析法将肝素结合蛋白从血浆中吸附出来,此时得到含有肝素结合蛋白的吸附液;

S6:通过解吸剂将肝素结合蛋白从吸附液中吸附出来。

优选的,所述的血管内含有炎症感染细菌菌体。

优选的,所述的血管为人类的血管。

优选的,所述的血管为与人类基因同源性高的哺乳动物的血管,所述血液样本从已有感染症状的哺乳动物血管中抽取,或者向人工饲养哺乳动物的血管中打入含感染病菌的菌液,等待12小时后检测哺乳动物已感染炎症后抽取血液样本,此时菌体已刺激中细粒细胞释放肝素结合蛋白。

优选的,所述S2中,血液样本放置于一灭菌容器内,将容器放在37℃的温水中隔水静置。

与现有技术相比,本发明的有益效果是:

1、该发明中,血液样本不仅仅使用人类感染区域血管中抽取的血液样本,还能采用与人类基因同源性高的有炎症哺乳动物的血液样本,在前期,通过类感染区域血管中抽取的血液样本与哺乳动物的血液样本的提纯对比实验来确定提取的有效性,并根据不同哺乳动物同样血液含量提取的肝素结合蛋白的含量不同来确定人工饲养哺乳动物的品种,后通过人工干预哺乳动物感染炎症,以此将提纯的样本内含量最大化,规模生产中肝素结合蛋白的含量才能有效增加;

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京立顶生物科技有限公司,未经南京立顶生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910969105.0/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code