[发明专利]膀胱癌肿瘤突变基因特异性引物、试剂盒和文库构建方法有效
| 申请号： | 201910970970.7 | 申请日： | 2019-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN110468211B | 公开（公告）日： | 2020-02-14 |
| 发明（设计）人： | 王龙;朱丽芳;陆利;曹曼曼;徐根明;潘艺;赵谦 | 申请（专利权）人： | 湖南大地同年生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11;C12Q1/6806;C40B50/06 |
| 代理公司： | 43114 长沙市融智专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410205 湖南省长沙市长沙*** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 膀胱癌 特异性引物 肿瘤突变基因 单分子 富集 引物 检测 突变 特异性序列 测序序列 高效灵敏 技术应用 检测领域 临床应用 文库构建 有效提供 肿瘤基因 多重PCR 单引物 扩增子 试剂盒 制备 样本 | ||
1.膀胱癌肿瘤突变基因特异性引物，其特征在于，包括SEQ ID No.1-156所示序列的引物。
2.膀胱癌肿瘤突变基因检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的膀胱癌肿瘤突变基因特异性引物。
3.根据权利要求2所述的膀胱癌肿瘤突变基因检测试剂盒，其特征在于，包括以下三种组合之一：（1）和（2），（3）和（4），（5）和（6）：
（1）按照说明书表1组合一中的浓度配制上游特异性引物组；
（2）按照说明书表1组合一中的浓度配制下游特异性引物组；
（3）按照说明书表1组合二中的浓度配制上游特异性引物组；
（4）按照说明书表1组合二中的浓度配制下游特异性引物组；
（5）按照说明书表1组合三中的浓度配制上游特异性引物组；
（6）按照说明书表1组合三中的浓度配制下游特异性引物组。
4.根据权利要求2所述的膀胱癌肿瘤突变基因检测试剂盒，其特征在于，还包括：对片段化核酸进行末端修复补平加A的末端修复反应试剂、对核酸进行分子标签接头连接的连接反应试剂。
5.膀胱癌肿瘤突变基因文库构建试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的膀胱癌肿瘤突变基因特异性引物。
6.根据权利要求5所述的膀胱癌肿瘤突变基因文库构建试剂盒，其特征在于，包括以下三种组合之一：（1）和（2），（3）和（4），（5）和（6）：
（1）按照说明书表1组合一中的浓度配制上游特异性引物组；
（2）按照说明书表1组合一中的浓度配制下游特异性引物组；
（3）按照说明书表1组合二中的浓度配制上游特异性引物组；
（4）按照说明书表1组合二中的浓度配制下游特异性引物组；
（5）按照说明书表1组合三中的浓度配制上游特异性引物组；
（6）按照说明书表1组合三中的浓度配制下游特异性引物组。
7.根据权利要求5所述的膀胱癌肿瘤突变基因文库构建试剂盒，其特征在于，还包括：对片段化核酸进行末端修复补平加A的末端修复反应试剂、对核酸进行分子标签接头连接的连接反应试剂。
8.膀胱癌肿瘤突变基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）对待检DNA样本的片段化核酸进行末端修复补平加A；
（2）对末端修复补平加A的片段化核酸进行分子标签接头连接；
（3）将上游特异性引物组和下游特异性引物组，分别与分子标签引物组合，对连接接头产物进行扩增子法靶向富集；SEQ ID No.1-78所示序列为根据各个突变区域上游设计的上游特异性引物组；SEQ ID No.79-156所示序列为根据各个突变区域下游设计的下游特异性引物组；
（4）对扩增子法靶向富集产物进行PCR富集；对PCR富集产物检测。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，上游特异性引物组和下游特异性引物组包括以下三种组合之一：（1）和（2），（3）和（4），（5）和（6）：
（1）按照说明书表1组合一中的浓度配制上游特异性引物组；
（2）按照说明书表1组合一中的浓度配制下游特异性引物组；
（3）按照说明书表1组合二中的浓度配制上游特异性引物组；
（4）按照说明书表1组合二中的浓度配制下游特异性引物组；
（5）按照说明书表1组合三中的浓度配制上游特异性引物组；
（6）按照说明书表1组合三中的浓度配制下游特异性引物组。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的突变包括点突变、缺失、插入、基因扩增、基因甲基化，基因融合中的一种或多种。
11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，核酸片段包括DNA或RNA。
12.一种膀胱癌肿瘤突变基因文库构建方法，其特征在于，是采用权利要求8-11任一项所述的方法中步骤4）获得的PCR扩增产物进行文库构建。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖南大地同年生物科技有限公司，未经湖南大地同年生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910970970.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
