[发明专利]纳豆芽孢杆菌产品的制备方法

权利要求书

1.一种纳豆芽孢杆菌的培养方法，包括菌种的活化、种子培养和菌种的发酵培养以及菌种收集，其特征在于：

所述菌种活化中采用的种子培养基的制备方法为：氯化钠5g/L,蔗糖10g/L，大豆蛋白胨10g/L，使用250mL三角瓶，每瓶分装25mL,115℃高压蒸汽灭菌20min；

所述菌种的发酵培养所采用的发酵培养基制备方法为：黄豆粉30g/L,蔗糖25g/L，磷酸氢二钾1g/L，磷酸氢二钾4g/L,硫酸铵0.3g/L，氯化钙0.6g/L，使用250ml三角瓶，pH7.0-7.2每瓶分装25ml，121℃高压蒸汽灭菌20min。

2.一种包含权利要求1所述纳豆芽孢杆菌的纳豆复合谷物粉的制备，其特征在于：包括以下步骤：

S1.纳豆的制备：精选黄豆，将所选黄豆进行清水浸泡、灭菌、粉碎，发酵处理，取质量为黄豆3％的菌泥与无菌生理盐水1:1的比例混合均匀，重悬过后的菌泥与碎黄豆混合均匀，放入39℃培养箱，发酵48h,发酵结束后，放入4℃冰箱进行后熟处理制得活菌数大于1x10¹¹CFU/g的纳豆；

S2.谷物粉的制备：谷物粉包括薏米、燕麦、糙米，小米、黄豆、红糙米、核桃仁和黑芝麻；其中的薏米、燕麦和小米经粉碎过筛后采用高压蒸汽灭菌处理后备用；黑芝麻、核桃经过炒制、粉碎过筛备用；黄豆、糙米和红糙米进行粉碎过筛处理后炒至断生，备用；

S3.纳豆与谷物粉的复合：将纳豆5-7质量份与炒制的黄豆粉、红糙米粉、黑芝麻粉、核桃粉、糙米粉以质量份为(4-6)：(3-5)：(5-8)：(5-7)：(5-8)：(2-3)配比混合均匀；再将其中加入步骤S2处理过的薏米2-4质量份、燕麦5-7质量份和小米3-7质量份，混合均匀即得最终产品。

3.一种利用权利要求1所述纳豆芽孢杆菌发酵的复合谷物粉的制备，其特征在于：包括以下步骤：

S1.谷物粉的制备：筛选多种谷物、粉碎过筛，并进行高压蒸汽灭菌；所述多种谷物包括黄豆、薏米、燕麦、糙米、小米和红糙米；

S2.菌液配制：取收集的菌泥与无菌生理盐水1:1的比例混合均匀；

S3.谷物粉发酵：将步骤S2配制的菌液与S1制备的谷物粉混合，放入培养箱发酵、再进行后熟处理；

S4.制取成品：将步骤S3处理的混合物粉碎过筛，得成品，放入冷藏冰箱保存。

4.一种权利要求1所述纳豆芽孢杆菌冻干粉的制备方法，包括将纳豆芽孢杆菌添加冻干保护剂进行冻干，其特征在于：

所述冻干保护剂为食品级化学物质的组合；

所述保护剂包含20mg/ml的海藻糖6-8ml、脱脂乳8-10ml、蔗糖4-6ml以及质量分数为5％的Vc钠盐、6％山梨醇、6％的甘露醇、3％的甘油分别4-6ml；

所述纳豆芽孢杆菌菌体和所述保护剂的体积比为(5-7):(12-13)；

所述冻干工艺包括以下步骤：将菌体和保护剂在低温无菌环境下快速混合均匀后，快速放入-80℃冰箱中进行预冻，预冻7个小时，放入预冷30min后的冻干机中进行冻干。

5.根据权利要求4所述的一种纳豆芽孢杆菌冻干粉制备方法，其特征在于：所述冻干过程分为三个阶段，预冻阶段、主冻干阶段和终了冻干阶段，其中主冻干阶段：隔板温度：-20℃，真空度；0.37mbar,安全压力：1.510mbar,设定时间：41h；终了冻干:隔板温度：+10℃，0.0010mbar，安全压力：1.030mbar,设定时:14h。

6.根据权利要求4所述的一种纳豆芽孢杆菌冻干粉制备方法，其特征在于：最终冻干粉活菌数大于4x10¹¹，冻干保护率大于50％。