[发明专利]一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种

说明书

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种。所述的动物双歧杆菌乳亚种命名为动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)HCS04‑001，该菌株已于2019年07月24日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.18292。本发明所述的动物双歧杆菌乳亚种是一株耐酸能力强、耐胆盐能力强，耐受胃、肠液能力强、耐热性好的动物双歧杆菌乳亚种。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一株耐酸能力强、耐胆盐能力强，耐受胃、肠液能力强、耐热性好的动物双歧杆菌乳亚种。

背景技术

国家卫生部于2010年将乳双歧杆菌列入《可用于食品的菌种名单》，2011年将乳双歧杆菌列入《可用于婴幼儿食品的菌种名单》。双歧杆菌属是定植于人体肠道内的有益菌，是健康人群肠道内的优势菌群。乳双歧杆菌是放线菌科双歧杆菌属动物双歧杆菌乳亚种，革兰氏阳性，无鞭毛，不运动，不形成芽孢，专性厌氧。双歧杆菌菌体形态各异，较典型的有V形、Y形、勺状、曲状。双歧杆菌属主要存在于人类和哺乳动物的肠道内，此外，有研究发现口腔中亦有双歧杆菌存在。

动物双歧杆菌乳亚种具有调节肠道菌群，防治肠道相关疾病、降胆固醇、增强机体免疫力、抗肿瘤、抗辐射等生理功能，其主要机理有：1、动物双歧杆菌乳亚种细胞壁上的磷壁酸与肠道黏膜上皮细胞经特异性结合，使其粘附于肠道黏膜表面，进而形成具有保护作用的生物菌膜，抑制致病菌粘附在肠道粘膜上；2、有研究证实在胆盐水解酶存在的情况下，通过与非共轭胆酸共沉淀可去除胆固醇；3、双歧杆菌可激活机体免疫，影响肠道内微生物的生理代谢活动并减少肠道内致癌物质（脱氧胆酸和石胆酸）的活性和诱导抗癌物质（醋酸和乳酸）的形成及表达。

动物双歧杆菌乳亚种已渐渐成为微生态制剂研究的一大热点，可应用于食品、畜禽养殖、医疗保健和基因工程等领域。在食品应用中，大多数以益生菌粉剂的产品剂型进行冲调食用，且常温贮存。然而在冲调食用过程或日常贮存中，较高的冲调水温或夏季高温环境情况下部分活菌会失活，只有耐热性较好的益生菌在较高温的环境下会更多的以活菌的状态进入人体，高温条件时保持较高的存活性。另外，菌体通过人体胃肠液并发挥益生功能的关键因素是其耐酸耐胆盐能力及耐受胃肠液的能力。因此，对获得耐热性好的菌体、增强菌体对胃酸、胆盐及胃肠液的耐性的研究具有重要意义。

发明内容

针对现有技术所述的动物双歧杆菌乳亚种耐热性差、耐酸和胆盐及胃肠液能力较差的问题，本发明的目的是提供一株耐热性好、耐酸和胆盐能力强、耐胃肠液能力强的动物双歧杆菌乳亚种菌株。进一步，本发明涉及提供包含该动物双歧杆菌乳亚种菌株或其培养液的组合物。

一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种，所述的动物双歧杆菌乳亚种命名为动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）HCS04-001，该菌株已于2019年07月24日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.18292。

一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种的培养方法，包括如下步骤：

1）一级培养：将保藏于-80℃的菌株冻存管取出，经解冻后，将1mL的菌悬液接种于10mL的改良乳酸菌培养基中，39℃静置培养；用接种环蘸取微量冻存管残存液体，于平板划线，37℃培养后，观察菌落；挑取少量菌落涂片，染色，观察显微镜下菌体；

2）二级培养：将一级培养得到的菌悬液按5%的接种量转接于改良乳酸菌培养基中，39℃静置培养17小时；

3）三级培养：将二级培养得到的菌悬液按5%的接种量转接于改良乳酸菌培养基中，39℃静置培养17小时；

4）将三级培养液进行离心，弃上清液，擦干离心管壁残留的上清液，收集菌泥。