[发明专利]一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法

权利要求书

1.一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，微生物发酵产几丁质酶，并获得浓缩酶液

将产几丁质酶的菌株接种至种子液培养基中，37℃、200rpm 条件下培养12 h，再以体积分数5% 的接种量接入装有产酶发酵培养基的摇瓶中，26℃，200 rpm，初始pH7.5的条件下发酵72 h后收集发酵液，并于4℃、8000 rpm下离心，分离菌体，收集上清液，即得几丁质酶粗酶液；

步骤2，碱冻融体系预处理几丁质

称取质量不超过反应体系4%的几丁质粉末，加入质量分数为4%～20%碱液混合均匀，混合溶液于-20℃～-80℃中冻融1～3次，累计冷冻时间6 h～24 h，每次冻融后均需取出在室温融化，并搅拌至冰水混合态，再重复冻融操作，待最后一次冻融融化后煮沸5～30 min充分析出几丁质后离心并回收上清碱液，再向析出的几丁质中加入PBS缓冲液搅拌重悬，重复离心去上清液，重复重悬，直至重悬后几丁质悬浊液呈中性；

步骤3，碱冻融体系辅助酶法降解几丁质与几丁质酶直接降解几丁质

吸取等量几丁质悬浊液和几丁质酶液于水浴锅中，37℃下反应0.5～3 h后，测定还原糖含量，计算几丁质的降解率。

2.根据权利要求1所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，步骤1中所述产几丁质酶的菌株为Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1或者Chitinolyticbacter sp. GC 72。

3.根据权利要求2所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，当步骤1中所述产几丁质酶的菌株为Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1时，酶解温度为20℃～37℃, 酶解时长为0.5 h～4 h。

4.根据权利要求1所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，步骤2中所述几丁质粉末的粒径为20-100目。

5.根据权利要求1所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，步骤2中的碱液为NaOH溶液或KOH溶液中一种或两种混合而成。

6.根据权利要求1所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，步骤2中混合溶液于-25℃～-80℃下冻融，累计冷冻时间6 h～12 h，冻融1次；或12 h～24 h期间冻融2～3次。

7.根据权利要求1所述的碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，步骤2中碱液的质量分数为8%～16%。