[发明专利]一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法

权利要求书

1.一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，其特征是，包括以下制备步骤：

（1）、预处理：将梅鱼鱼头进行清洗后绞碎，在料液比为1:6-9 (m/v)，温度为48-52℃的条件下，用94-96%的甲醇水浴脱脂2-2.2h；脱脂后将上清液倒掉，用纯水将沉淀洗净，将脱脂鱼头肉在0-4℃、11900-12000 r/min条件下离心20-25min，收集沉淀；

（2）、酶解：将鱼头肉加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中，中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼头肉质量的2-4倍，酶解温度为30-45℃，酶解液pH至控制在5-6，酶解时间为5-5.4h；

（3）、过滤得澄清液：向酶解液中添加质量为酶解液1-2wt%的改性果壳活性炭，并将酶解液加热并脱色；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液；

所述改性果壳活性炭的制备步骤为：

对果壳活性炭，先用0.5-0.8mol/L 稀硫酸于60-65℃ 浸泡果壳活性炭1.8-2.2h，将样品过滤后再缓慢加入0.8-1mol/L的盐酸，于60-70℃浸泡8-10h 后用去离子水洗涤至中性，后加入去离子水98-100℃煮沸1.8-2.2h，之后用纯水冲洗2-3次后，置于98-102℃烘箱中烘干；称取预处理后的果壳活性炭，分别用15-18%的氨水浸泡并磁力搅拌1.8-2.2 h，再用去离子水将上述果壳活性炭冲洗至pH值达到6.8-7为止，然后在98-102℃下干燥22-24 h，即可得到改性后的果壳活性炭；

（4）、分离纯化：将澄清液鼓气起泡，并收集泡沫液，在鼓气的同时注水；鼓气速率为3-4L/min，注水速率为0.2-0.3L/min，澄清液温度保持在25-35℃；待收集的泡沫液灭泡后，对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-60min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7-7.2的缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，得到洗脱液，再将洗脱液的pH调至6-8之间，然后用乙酸乙酯提取，并于35-40℃下进行蒸干浓缩，使得浓缩液浓度为25-30%；

（5）、多肽分级：采用膜对浓缩液按分子量进行分离，膜为孔径为10-50nm的超滤膜或纳滤膜，得到目标分子量1200-3800Da的抗真菌肽；

（6）、培养观察抑菌圈：琼脂扩散法筛选多肽的抗真菌活性，将多肽物质添加至含有黑曲霉标准菌株的培养基，观察抑菌区域，测量抑菌直径。

2.根据权利要求1所述的一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，其特征是，步骤（3）中加热温度为70-80℃，脱色时间为30-40min。

3.根据权利要求1所述的一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，其特征是，步骤（6）所述的培养条件为36-38℃培养70-72h。